Biomedicina

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69Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
de hemoglobina em um determinado volume de hemácias pelo nº de células contidas 
no mesmo volume. Calculado pela fórmula:
 H.C.M= Hemoglobina x 10 
      Eritrócitos
3. Concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM): É a percentagem de 
hemoglobina em 100 mL de hemácias. Calculada pela fórmula: 
 C.H.C.M = Hemoglobina x 100 
       Hematócrito
4. Amplitude de distribuição dos eritrócitos -RDW / (red blood cell distribution width): 
É um subproduto da medida eletrônica do volume dos eritrócitos; ou seja, só pode 
ser detectado por equipamento automatizado. O seu valor normal está entre 11 e 
14 %. Valores encontrados abaixo do normal indicariam hemácias mais homogêneas. 
Valores acima de 14 indicam excessiva heterogeneidade da população (anisocitose) 
sendo notada durante o exame direto no microscópio.
A tabela abaixa apresenta algumas condições em que os índices hematológicos estão 
alterados: 
Tipo de Anemia VCM CHCM
Macrocítica normocrômica >98 32 a 35
Normocítica normocrômica 80 a 98 32 a 35
Microcítica normocrômica < 80 32 a 35
Microcítica Hipocrõmica < 80 27 a 32
3. PRÁTICA: Dosagem de hemoglobina método da cianometemoglobina
A hemoglobina (Hb) é a proteína presente em abundância no interior da hemácia. Seu 
percentual é reduzido em anemias e pode ter sua conformação alterada devido à combinação 
com outros compostos. A molécula de Hb é formada por uma parte proteica constituída de 
quatro cadeias de globina e uma parte não proteica que contém o íon ferro denominada 
grupo heme. O íon ferro se combina de maneira reversível ao oxigênio, e assim cada molécula 
de hemoglobina pode carregar quatro moléculas de oxigênio. O princípio da prática descrita 
abaixo se deve à formação de metahemoglobina em combinação com o ferrocianeto e 
posterior combinação com o cianeto para formação da cianometahemoglobina. É feita a 
leitura da absorbância no espectrofotômetro e a absorbância desenvolvida é diretamente 
proporcional à concentração de hemoglobina na amostra. 
Materiais:
- Sangue total colhido com EDTA 0,2%. O conteúdo hemoglobínico no sangue será 
estável por sete dias a 4°C; 
- Reativo de cor (concentrado): Reagente composto por: Ferrocianeto de potássio, 
cianeto de potássio, tampão e tensoativo. CUIDADO: Tóxico!
- Padrão: Solução de cianeto de hemoglobina, equivalente a 10 g/dL de hemoglobina, na 
metodologia utilizada;
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da teoria à bancada SUMÁRIO
- Água destilada; 
- Espectrofotômetro com filtro para 540 nm, ou filtro verde;
- Luvas;
- Jaleco;
- Tubos de ensaio;
- Pipetas;
- Ponteiras
Procedimentos: 
1. Diluir o reativo de cor (concentrado) para 1.000mL com água destilada. Se o volume 
desejado for menor, dilua o concentrado na proporção de 1:100. Manter sob 
refrigeração (4°C) e ao abrigo da luz.
2. Homogeneizar, repousar 5 minutos em temperatura ambiente e proceder às leituras 
de absorbância, acertando o zero com água destilada. Preparar o padrão e a amostra 
teste conforme tabela abaixo:
Tabela para preparo das amostras a serem dosadas:
  Padrão Teste
Reagente de trabalho 5,0 mL 5,0mL
Padrão 0,02 mL -
Amostra -  0,02 mL
3. Proceder à leitura da absorbância da solução padrão em 540 nm ou filtro verde 
(520-550 nm), acertando o zero com água destilada. O padrão está pronto para uso, 
portanto não deverá ser diluído com o reagente de trabalho.
4. Anotar os valores das absorbâncias e aplicar na fórmula abaixo:
Concentração amostra = Abs. Amostra x Concentração do padrão
            Abs. padrão
Valores de referência: Homens 13,5 a 18 g/dL; Mulheres 11,5 a 16 g/dL
Observação: esta dosagem também pode ser feita em equipamento automatizado para 
hematologia. 
Algumas situações que podem aparecer: 
Pecilocitose ou poiquilocitose: presença de formas anormais dos eritrócitos. Deve ser 
sempre mencionado quando observado na lâmina. Entre as formas anormais temos: Eliptócitos 
ou ovalócitos (eritrócitos ovais, elípticos), Estomatócitos (eritrócitos cuja membrana retraiu-
se em cúpula), Esferócitos (eritrócitos praticamente esféricos), Drepanócitos ou eritrócitos 
falciformes (eritrócitos em forma de foice, devido á hemoglobina S), Hemácias em alvo 
(eritrócitos mais delgados que o normal que, quando corados, exibem uma borda periférica de 
hemoglobina com uma área central escura), Equinócitos (ou hemácias crenadas), Esquizócitos: 
(pedaços de eritrócitos cortados pelo trauma). 
Macrocitose: É a elevação do VCM acima de 98 fL. Geralmente acompanha uma 
população normocítica ou microcítica concomitante; ou quando o VCM estiver acima