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79Biomedicina na prática: da teoria à bancada SUMÁRIO 9.1. Determinação do Tempo de Protrombina (TP) O TP mede a via extrínseca de coagulação, prolongando-se nas deficiências seletivas ou conjuntas dos fatores de coagulação (II, V, VII e X) ou podem estar alterados em hepatopatias e durante o tratamento com anticoagulantes orais. A técnica baseia-se no principio de que se ao adicionar a tromboplastina ao plasma e ocorrendo a formação de coágulo, determina-se a atividade da protrombina no sangue. Materiais: - Amostra sanguínea com citrato de sódio 3,2 ou 3,8%; - Pipeta automática 100μL; - Pipeta automática 200μL; - Ponteiras; - Banho maria 37º C; - Cronômetro; - Tubo vidro; - Reativo TP; - Centrífuga; - Luvas; - Jaleco Procedimentos: 1. Centrifugar a amostra durante 10 minutos a 2.000 rpm; 2. Aquecer a amostra e o reativo a 37ºC; 3. Transferir 200 mL do reativo para um tubo; 4. Adicionar 100μL da amostra, disparar o cronômetro e homogeneizar; 5. Inverter o tubo constantemente até visualizar o início da coagulação, neste momento travar o cronômetro; 6. Anotar o tempo; 7. Calcular a atividade da protrombina, baseado na padronização e valores de referência do laboratório. Valores de referência: 12 a 13 segundos Dica: O TP é útil para o diagnóstico da coagulação intravascular disseminada. É usado para monitoramento do tratamento com varfarina. O seu tempo está prolongado em paciente em uso de varfarina, depleção do fibrinogênio e doenças hepáticas. 9.2. Tempo de Tromboplastina Parcial Ativado (TTPa) Este teste avalia a via intrínseca de coagulação. A avaliação é semelhante à técnica de avaliação da TP. O tempo de tromboplastina parcial corresponde ao tempo gasto para ocorrer a coagulação do plasma recalcificado em presença de um fosfolípide ou tromboplastina parcial. 80Biomedicina na prática: da teoria à bancada SUMÁRIO Materiais: - Amostra sanguínea com citrato de sódio 3,2 ou 3,8%; - Pipeta automática 100μL; - Pipeta automática 200μL; - Ponteiras; - Banho maria 37º C; - Cronômetro; - Tubo vidro; - Reativo TTPa; - Centrífuga. - Luvas; - Jaleco; Procedimentos: 1. Em um tubo de ensaio aquecido a 37° C colocar 0,1mL de plasma normal e 0,1mL do reativo TTPa (cefalina- caolin); 2. Agitar uma vez e incubar a 37° C por três minutos. 3. Após os 3 minutos, adicionar 0,1 mL da solução de cloreto de cálcio rapidamente e ao mesmo tempo acionar o cronômetro. 4. Agitar no banho por 25 segundos. Retirar o tubo do banho-maria e invertê-lo a cada segundo, observando o momento em que houver a coagulação. Neste instante parar o cronômetro. O tempo gasto em segundos para ocorrer a coagulação é o tempo de tromboplastina parcial. Dica: O TTPa mede a via intrínseca de coagulação, prolongando-se nas hemofilias e na maioria das demais coagulopatias, com exceção das deficiências dos fatores VII e XII, também é utilizado para monitorar o tratamento com heparina. Referências BERNARD, J.J. Manual de Hematologia.São Paulo: 3ª ed. Masson do Brasil,1986. FAILACE, R. Hemograma: manual de interpretação. 3ª ed. Porto Alegre: Artes Médicas, 1995. HENRY, J.B. Diagnósticos Clínicos e Tratamento por Métodos Laboratoriais. Editora Manole,1999. LIMA; et al. Métodos de laboratórios aplicados à clínica. 7ª ed. São Paulo: Guanabara Koogan, 1992. MELO, M.A.W., SILVEIRA, C.M. Laboratório de hematologia: teorias, técnicas e atlas. 1ª ed. Rio de Janeiro: Rubio, 2015. VIVAS, W.L.P. Manual prático de Hematologia. Disponível em: <http://www.aa.med.br/upload/ biblioteca/Manual%20de%20Hematologia.pdf>. http://www.aa.med.br/upload/biblioteca/Manual de Hematologia.pdf http://www.aa.med.br/upload/biblioteca/Manual de Hematologia.pdf