Biomedicina

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87Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Observação: Os testes positivos devem ser encaminhados para laboratório especializado 
para realização de estudos. A presença de aglutinação indica que as hemácias podem estar 
sensibilizadas por anticorpos ou por componentes do complemento. 
Importante: Anticorpos contra o fator Rh geralmente não aglutinam células vermelhas 
sanguíneas. Portanto, hemácias de crianças Rh+ nascidas de mães Rh- que têm anticorpos 
anti-Rh, devem estar cobertas por esses anticorpos. Para verificar isso, é realizado um teste de 
Coombs direto. Para ver se a mãe têm anticorpos anti-Rh no seu soro se realiza um teste de 
Coombs Indireto.
5 PRÁTICA: Determinação do fator reumatoide (FR) pela técnica de Látex 
(Aglutinação Passiva)
Doenças autoimunes são doenças onde o organismo cria anticorpos que atacam os 
próprios tecidos. A artrite reumatoide é um tipo de doença autoimune comprometendo as 
articulações. A maioria dos soros de pacientes portadores de artrite reumatoide apresenta 
imunoglobulinas tipo IgG, e por isso o corpo produz outra imunoglobulina (do tipo IgM), 
conhecida por Fator Reumatoide para combater este “auto-anticorpo” que age como uma 
“antígeno”. Deste modo a interação entre elas é uma reação é do tipo antígeno-anticorpo. 
A presença da artrite reumatoide pode ser confirmada pela positividade da prova de látex, 
método que avalia o Fator Reumatoide. 
O reativo látex FR é uma suspensão de partículas de látex sensibilizadas com IgG 
humana. As partículas de látex formam a reação antígeno-anticorpo se ocorrer a presença do 
Fator Reumatoide no soro, produzindo aglutinação. 
Materiais: 
- Luvas;
- Jaleco;
- Cartão para teste de aglutinação;
- Kit do Fator reumatoide;
- Haste para homogeneização;
- Soro do paciente;
- Cronômetro;
- Pipetadores;
- Ponteiras;
- Palito descartável.
Procedimentos: 
1. Estabilizar o reativo látex, o controle negativo e o controle positivo à temperatura 
ambiente (20-30ºC), para sua utilização; 
2. Homogeneizar o reativo látex suavemente, para dispersar e ressuspender as partículas 
de látex na solução. Importante: Evitar uma agitação violenta do reativo; 
3. Colocar 25 µL de controle positivo, controle negativo e de soro em secções individuais 
na placa; 
4. Colocar 1 gota do reativo junto a cada gota de controle e soro; 
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5. Misturar ambas com um palito descartável, procurando estender a mistura por toda 
a superfície interior do círculo. Importante: Empregar palitos distintos para cada 
amostra e/ou controle; 
6. Agitar a placa com um suave movimento de rotação seja manualmente durante 2 
minutos; 
7. Observar a presença ou ausência de aglutinação no soro, comparando com o controle 
negativo e positivo;
8. Análise os resultados: 
a) A presença de aglutinação indica um conteúdo de Fator Reumatóide no soro igual ou 
superior a 20 UI/mL; 
b) A ausência de aglutinação indica um conteúdo de Fator Reumatóide no soro inferior 
a 20 UI/mL 
Valor de referência: inferior a 20 UI/ml
6. PRÁTICA: ELISA- teste enzimático: Formação de complexo antígeno- anticorpo 
in vitro
O método de ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) baseia-se nas reações 
antígeno-anticorpo detectáveis através de reações enzimáticas. A enzima mais comumente 
utilizada nestas provas é a peroxidase, que catalisa a reação de desdobramento do peróxido 
de hidrogênio (H2O2) em H2O mais O2. Neste método a amostra é diluída no suporte no qual 
se encontra o antígeno imobilizado. Se a mesma contiver os anticorpos específicos, estes 
formarão um complexo com os antígenos e permanecerão unidos. A fração não unida é 
eliminada por lavagem, posteriormente é acrescentado os anticorpos anti-imunoglobulina 
humana marcados pela enzima peroxidase (chamado de anticorpo conjugado). Caso ocorra 
a reação na primeira etapa do processo, o conjugado se unirá ao anticorpo da amostra. Ao 
adicionar-se o substrato apropriado para a enzima (isto é, H2O2 dissolvida em uma substancia 
química que dá uma reação colorida quando H2O2 é desdobrada) (ver figura abaixo). Os locais 
da placa onde ocorreu a reação antígeno-anticorpo apresentarão uma coloração (variável 
dependendo do substrato). A reação se detém com ácido sulfúrico (reagente de parada).