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73Biomedicina na prática: da teoria à bancada SUMÁRIO 50 a 85 anos: Homens até 20 mm/hora, mulheres até 30 mm/hora. < 85 anos: Homens até 30 mm/hora, mulheres até 42 mm/hora. Observe: Alguns erros analíticos podem acelerar a VHS levando a resultados falso-positivos. A inclinação do tubo provoca separação do plasma e das hemácias, o que promove a formação de rouleaux e aumento da sedimentação. Uma inclinação de apenas 3º pode provocar aumento de até 30% na VHS. Uma concentração de anticoagulante maior que a recomendada e temperatura ambiente elevada (>25ºC), também aumentam a VHS. O uso de medicamentos, especialmente heparina e contraceptivos orais, é, também, capaz de aumentar a VHS. 6. PRÁTICA: Contagem de leucócitos Os leucócitos são as células menos abundantes, envolvidos no sistema de defesa do organismo contra doenças e infecções. São transportados pelo sangue para todo o corpo, a partir da medula óssea, onde são formados. Normalmente existem cerca de 4.000 a 10.000 leucócitos por milímetro cúbico de sangue em adultos. O leucograma corresponde a contagem global e específica dos leucócitos em câmara de Neubauer para evidenciar alterações patológicas. Materiais: - Amostra de sangue com EDTA; - Pipetas automáticas; - Ponteiras; - Papel absorvente; - Câmara de Neubauer; - Lamínula; - Luvas; - Jaleco; - Agitador hematológico; - Tubo vidro com tampa para diluição e homogeneização; - Capilar de microhematócrito; - Líquido de Turk; - Microscópio. Procedimentos: 1. Homogeneizar a amostra sanguínea em agitador hematológico por pelo menos 5 minutos. 2. Diluir a amostra 1:20 (50μL da amostra + 0,95 mL Líquido de Turk). 3. Homogeneizar em agitador mecânico por 5 minutos a diluição para lise dos eritrócitos. 74Biomedicina na prática: da teoria à bancada SUMÁRIO 4. Cobrir a Câmara de Neubauer com lamínula. 5. Com o auxílio de um tubo capilar retirar a solução diluída e com a ponta do capilar tocar na ranhura entre a câmara e a lamínula nas duas extremidades, o líquido por capilaridade preencherá o espaço, não deixar transbordar ou criar bolhas. 6. Deixar as células na câmara em repouso por 5 minutos. 7. Contar os quatro quadrantes laterais da câmara dos dois lados, utilizando objetiva de 10X e diafragma parcialmente fechado. Dica: Para evitar confusão na contagem de células que ficam nas linhas divisórias, proceder da seguinte maneira: As células que tocam qualquer uma das três linhas ou a linha única da esquerda, ou no topo das divisórias dos quadrados pequenos devem ser contadas como se estivessem dentro dos quadrados, mas as linhas que tocam qualquer das linhas à direita e em baixo das divisórias, não devem ser contadas. Cálculo: Leucócitos por mm3 = Nº leucócitos contados na câmara x diluição x 10 Nº quadrados grandes contados O número 10 corresponde ao fator que transforma o valor de um quadrado grande (1/10mm3) para o volume em mm3 Valores de referência adulto: 4.000 a 10.000 mm3 7. PRÁTICA: Contagem diferencial de leucócitos Consiste na contagem de 100 leucócitos em esfregaço sanguíneo diferenciando-os de acordo com suas variedades morfológicas. Importante para determinação do processo infeccioso e do agente envolvido, bem como para avaliação de leucemias e linfomas. Materiais: - Amostra de sangue com EDTA; - Pipetas automáticas; - Ponteiras; - Papel absorvente; - Lamínula; - Lâmina; - Luvas; - Jaleco; - Agitador hematológico; - Capilar de microhematócrito; - Corante Panótico; - Microscópio.