1 - Revisão de Pipetagem

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Pipetas 
e 
Pipetagem
Os instrumentos de medição são essenciais para qualquer laboratório ou indústria que necessita de medições corretas de volumes. 
A qualidade dos resultados das análises é dependente da exatidão com que são medidos os volumes das amostras ensaiadas ou dos reagentes adicionados.
Mesmo os mais sofisticados instrumentos automáticos de análise oferecem resultados confiáveis somente quando o material volumétrico empregado na preparação de reagentes e amostras for suficientemente preciso e direcionado ao uso pretendido.
A calibração e o uso adequado dos instrumentos de medição têm grande influência no resultado final de um ensaio. 
É importante avaliar e reduzir, onde for possível, os erros sistemáticos e aleatórios que possam influenciar o bom desempenho do laboratório
Introdução
Pipeta
Instrumento de medição e transferência rigorosa de volumes líquidos.
Há dois tipos clássicos de pipetas:
pipetas graduadas: possuem uma escala para medir volumes variáveis;
pipetas volumétricas: possuem apenas um traço final, para indicar o volume fixo e final indicado por ela, sendo estas mais rigorosas que as graduadas.
Pipetas Graduadas
pipetas volumétricas de esgotamento total, ou  pipetas de sopro. 
um traço ou nenhum
dois traços
pipetas volumétricas de esgotamento parcial.
Acerto do Menisco
CUIDADOS NECESSÁRIOS PARA USO CORRETO DAS PIPETAS
Não pipetar com a boca. Utilizar sempre um dispositivo para a pipetagem 
Utilizar pipetas íntegras, descartar as pipetas que apresentem pontas quebradas;
Utilizar pipetas limpas e secas;
Utilizar pipetas com volume total o mais próximo possível do volume a ser medido;
Para medidas de soluções viscosas, evitar que o líquido ultrapasse muito a marca de medida, limpar a parte externa da pipeta e lavar a mesma várias vezes na solução que irá receber o material pipetado;
Nas soluções incolores coloca-se o menisco inferior na marca de calibração enquanto que nas soluções coradas o acerto se faz na parte superior do menisco
Os olhos devem estar posicionados na altura da leitura do menisco 
Utilizar a pipeta sempre na posição vertical (tanto para aspirar como para desprezar o líquido);
O fluxo do líquido deve ser contínuo.
EVITANDO A PARALAXE
EVITANDO A PARALAXE
A superfície de um líquido confinado num tubo estreito exibe uma curvatura marcante, ou menisco, que consiste na interface entre o ar e o líquido a ser medido.
Para acerto do menisco, seu olho deve estar no nível da superfície do líquido para assim evitar um erro devido à paralaxe
Paralaxe é um fenômeno que ocorre através da observação errada do valor da escala analógica do instrumento, devido ao ângulo de visão.
 
Pipetas Automáticas
Inventadas na década de 1940 por George Riggs. 
Pretendia ser uma alternativa às pipetas graduadas de vidro, utilizadas pelos inspetores de leite para recolher amostras visando avaliar a presença de bactérias. 
A pipeta automática facilitaria o trabalho e preveniria a contaminação dos inspetores, pois dispensava a sucção do líquido com a boca.
Atualmente as pipetas automáticas são amplamente utilizadas, principalmente em laboratórios de Biologia Molecular, Microbiologia e Bioquímica. 
Elas são capazes de transferir pequenos volumes (entre 0,25 µL – 5000 µL) com alta reprodutibilidade e exatidão. 
Existem pipetas automáticas de volume fixo e volume ajustável
Pipeta Automática
Volume Fixo
Pipeta Automática
Volume Ajustável
Aperte o botão de pipetagem até sentir o primeiro ponto de resistência. 
Para fazer o líquido subir na ponteira, volte lentamente o botão para a posição inicial. 
Para dispensar o líquido, aperte novamente o botão até sentir a segunda resistência. 
Para retirar a pipeta do recipiente, mantenha o botão apertado no segundo ajuste e deslize cuidadosamente a ponta da ponteira pela parede do recipiente.
Volte o botão para a posição inicial lentamente. 
Para descartar a ponteira, aperte o botão ao lado do botão de pipetagem.
Transferência de volumes pequenos
Ponteiras
Cuidados técnicos
Não exceda o volume máximo recomendado de cada pipeta, pois o mecanismo de ajuste de volume pode ser danificado. 
Também não utilize menos do que o mínimo recomendado, pois isso diminui a exatidão das medidas.
O braço contendo o mecanismo ejetor de ponteiras pode ser retirado caso o frasco de onde se pretende retirar o líquido seja muito estreito.
Geralmente as pipetas são calibradas utilizando água. 
Para líquidos com densidades muito diferentes da água, os volumes transferidos são incorretos. 
Para contornar este problema é possível ajustar o volume para mais (densidades muito maiores) ou para menos (densidades muito menores). 
No entanto, este ajuste deve ser determinado empiricamente, utilizando-se valores de densidade e massa (lembre que volume = massa/densidade).
Nunca coloque a pipeta na posição horizontal se a ponteira estiver cheia de líquido. Isso pode causar a entrada de líquido no sistema de pistões, o que irá danificar a pipeta.
Caso soluções corrosivas sejam transferidas é recomendado que, após o uso, a pipeta seja desmontada para avaliação das peças e para limpeza, se necessário. 
O desmonte e descontaminação também são recomendados após o uso com substâncias tóxicas e/ou carcinogênicas.
Evite a formação de bolhas quando aspirar o líquido.
 Isso reduz a precisão das medidas. 
Caso ocorra a formação de bolhas, dispense o líquido no frasco original, e faça subir o líquido novamente de forma lenta. 
Caso volte a formar bolhas, dispense o líquido no frasco original e troque a ponteira. 
O uso de ponteiras siliconizadas também pode evitar a formação de bolhas em casos em que estas sejam recorrentes, como na pipetagem de soluções de ácidos nucleicos.
Cuidados com a segurança
Use o EPI: óculos de segurança, avental, luvas e calçados fechados.
Outras Pipetas
Utensílio semelhante a um conta-gotas, geralmente formado por um tubo de vidro de ponta afilada. 
Serve para efetuar a transferência de pequenas porções de líquidos.
Criada pelo químico francês Louis Pasteur, recebe este nome em sua homenagem
Pipeta de Pasteur 
Utilizada em exames para determinar a velocidade de hemossedimentação (VHS) pelo método de westergreen.
Emprega-se a pipeta de Westergren, graduada de 0 a 200 mm, que é preenchida com sangue colhido com anticoagulante até a marca zero. 
A pipeta é fixada na posição vertical em um suporte próprio e a leitura da VHS é feita na 1ª e na 2ª Hora.
Pipeta de Westergren
Pipeta Multicanal
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