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Débora Marroni Eduardo Germano Professora: LUCIENNE FRANÇA REIS PAIVA Turno: MANHÃ Curso: FARMÁCIA DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA CLÍNICA 2021.1 ATIVIDADE 6 ORIENTAÇÕES Este exercício pode ser realizado em grupo (preferencialmente) ou individualmente. Para ser enviado até 22/06/2021 pelo e-mail: luciennefranca@gmail.com Para realizá-lo além de aulas teóricas (slides), livros, dentre outros, consultarem a apostila de aula prática 9. REFERENTE ÀS AULAS ONLINE E VÍDEOS-AULAS DE “METODOLOGIA E INTERPRETAÇÃO DOS PRINCIPAIS TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS E PADRONIZAÇÃO BRCAST (BRAZILIAN COMMITTEE ON ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY TESTING) E “TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS – DIFUSÃO DE DISCOS (KIRBY-BAUER)”. PARA FIXAÇÃO DO APRENDIZADO E PONTUAÇÃO DE A2. mailto:luciennefranca@gmail.com Reprodutibilidade aceitável entre bateladas. Níveis baixos de inibidores de sulfonamidas, trimetoprim e tetraciclinas. Crescimento satisfatório da maioria dos patógenos não exigentes. Vasta experiência prática e científica acumulada. Preparar o meio a partir de uma base desidratada comercial de acordo com instruções do fabricante. Concentração de ágar, concentração de íons no ágar, e características nutritivas devem ser garantidas pelo fabricante. Controle rigoroso do pH. O pH final pós-preparo deve estar entre 7,2 – 7,4. Controle da umidade. A altura da camada do ágar depositado na placa de Petri deve ser de 4 ± 0,5 mm. A uniformidade e o tamanho de espessura são importantes, pois garantem a adequada difusão do antibiótico no ágar. Testes de cepas controle e teste de esterilidade devem ser feitos em cada lote de meio preparo. A temperatura de incubação deve ser rigorosamente entre 35 ± 1° C (consultar tabela do documento), sem atmosfera de CO2, para também se garantir a adequada difusão da droga do meio. 1. Antibiograma é um ensaio que mede a sensibilidade ou resistência de uma bactéria aos antibióticos através do espectro de susceptibilidade identificados na placa de cultura. Assinale a alternativa que apresenta o meio de cultura utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus spp. a) Caldo Selenito b) Meio Ágar Müeller Hilton c) Meio Ágar Citrato Simmons d) Meio Ágar Sabouraud e) Meio Ágar TSI – triplo açúcar ferro 2. Em relação ao antibiograma pelo método de Kirby-Bauer, indique em que consiste o método utilizado, o meio de cultura padronizado pelo BrCAST e as principais considerações sobre o inóculo. Resposta: É um método que oferece resultados qualitativos, ou seja, o micro-organismo é avaliado como sensível (S), intermediário – sensível aumentando exposição (I) ou resistente (R) aos diferentes antimicrobianos testados, de constante padronização e de custo razoável, razão pela qual é mais utilizado nos laboratórios de Microbiologia. Dentre os meios de cultura disponíveis, o BrCast considera o Ágar Mueller-Hinton o melhor para uso rotineiro pelos seguintes motivos: Para garantir essas qualidades do ágar Mueller-Hinton, deve-se observar alguns itens: 3. A sensibilidade dos micro-organismos à ação das drogas antimicrobianas pode ser determinada in vitro por meio de antibiograma. Utiliza-se o teste para verificação do efeito bactericida e bacteriostático, bem como para a demonstração das drogas que exercem esse efeito. Em relação ao Teste de Diluição em Caldo de Cultura para determinação da susceptibilidade microbiana às drogas, é INCORRETO afirmar que: a) é utilizada de uma série de tubos contendo diferentes concentrações conhecidas do agente antimicrobiano. b) a mesma concentração do inóculo bacteriano é adicionada nos tubos. c) a etapa de incubação é essencial para realização da leitura do teste. d) pela leitura é determinada a concentração inibitória mínima (CIM ou MIC). e) a CIM ou MIC é definida como a menor concentração de agente antimicrobiano que ainda apresenta crescimento visível. 4. Considerando-se a complexidade dos processos infecciosos, desde a problemática do estabelecimento de sua etiologia até a dificuldade de implantação da opção terapêutica mais adequada, o suporte laboratorial é de suma importância para a adoção das estratégias mais adequadas, visando à recuperação do paciente e à prevenção de eventos alarmantes de saúde pública, como a potencialização global da resistência microbiana. Sob essa ótica, o Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA) torna-se imprescindível. Com base nos parâmetros de fundamentação, realização e interpretação desse teste, analise as afirmativas abaixo e assinale a opção CORRETA. a) Permite determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) do antimicrobiano por meio dos métodos de Etest® e pelo preconizado por Kirby -Bauer. b) Existe padronização realizada pelo BrCAST (Brazilian Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) para todas as bactérias isoladas e independentes, inclusive, do número obtido na quantificação, quando prevista. c) Pode ser realizado empregando-se diferentes meios de cultura, sendo um deles o Ágar MacConkey. d) Inóculo fora do padrão, características e espessura do meio de cultura e tempo e atmosfera de incubação podem alterar o resultado do teste. e) A CIM pode ser calculada pelo diâmetro do halo de inibição com base em tabelas do BrCAST que fazem a correlação entre o halo em mm e a CIM em mg/mL. 5. Cada uma das seguintes afirmativas com respeito à realização do antibiograma está correta, mas uma delas está incorreta. Assinale a afirmativa INCORRETA: a) O ágar Mueller-Hinton é o meio padronizado para a realização do antibiograma. b) A presença de qualquer halo de inibição indica sensibilidade da cepa testada ao antibiótico ou ao quimioterápico do disco. c) Não se comparam halos de inibição de antibióticos diferentes. d) O antibiograma de bactérias exigentes como espécies de estreptococos, deve ser realizado em Ágar Mueller-Hinton, acrescido de 5% de sangue desfibrinado de cavalo. 6. A ESBL - β – lactamase de espectro estendido - é: a) organela constituinte da célula bacteriana b) enzima que confere resistência a algumas bactérias c) antimicrobiano testado para Bastonetes Gram negativos d) fator de crescimento de Escherichia coli e) as respostas a e d são corretas. 7. Paciente do sexo masculino 50 anos, após uma semana no leito de uma unidade de terapia intensiva, seu médico suspeita de uma septicemia. Na cultura de sangue, o micro-organismo isolado foi Klebsiella pneumoniae produtora de ESBL. Quais dos antimicrobianos abaixo seriam reportados a resistência? a) Meropenem, imipenem e ertapenem. b) Penicilinas, cefalosporinas e monobactan (aztreonam). c) Carbapenêmicos e imipenem. d) Meropenen e penicilina. e) Penicilina, amicacina. 8. Segundo a padronização do BrCAST para o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos é correto afirmar, EXCETO, portanto assinale a questão INCORRETA: a) o meio de cultura a ser utilizado é o Ágar Mueller-Hinton para a maioria dos micro-organismos b) o máximo de discos a ser colocado em uma placa de 150 mm é de 12 discos c) o inóculo deve obedecer ao padrão de turvação da escala 0,5 de MacFarland d) o método de Kirby-Bauer fornece resultados qualitativos e) o método do E-test não é usado rotineiramente por ser impreciso, não reprodutível 9. Staphylococcus aureus MRSA, resistentes à oxacilina, são diagnosticados laboratorialmente analisando o perfil de resistência em cultura dos discos de: a) Novobiocina b) Oxacilina c) Cefoxitina d) Vancomicina e) Cefotaxima 10. Se um clínico receber um resultado de antibiograma de Staphylococcus apresentando resistência à eritromicina e sensibilidade à clindamicina espera-se que o Laboratório de Microbiologia tenha realizado qual teste para certeza da real sensibilidade da clindamicina: a) Teste de ESBL b) D-teste c) Pesquisa de KPC d) Pesquisa de AmpC e) Teste de Hodge modificado 11. A sensibilidade dos micro-organismos à ação das drogas antimicrobianas podeser determinada in vitro por meio de antibiograma. Utiliza-se o teste para verificação do efeito bactericida e bacteriostático, bem como para a demonstração das drogas que exercem esse efeito. Sobre os antibiogramas identifique as afirmativas abaixo em verdadeiras (V) ou falsas (F). ( V ) O antibiograma dado como qualitativo é feito por método de difusão. ( F ) Não há diferença de métodos empregados nos antibiogramas qualitativo e quantitativo. ( V ) O antibiograma dado como quantitativo é feito por método de diluição. ( V ) O método quantitativo é capaz de determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) para um determinado micro- organismo. ( F ) A diferença entre os antibiogramas qualitativo e quantitativo se dá unicamente pelo custo e material empregado. A sequência correta é: a) V, F, V, V, F b) V, V, V, F, F c) F, F, V, V, F d) F, V, F, F, V e) V, F, V, F, V 12. Certas bactérias são ESBL positivas, ou seja, produzem betalactamase de espectro estendido, conferindo à bactéria resistência às penicilinas, cefalosporinas e aztreonam. Esta característica ocorre nas seguintes bactérias, EXCETO, portanto assinale a opção INCORRETA: a) Klebsiella oxytoca b) Klebsiella pneumoniae c) Escherichia coli d) Staphylococcus saprophyticus e) Outras enterobactérias 13. Marque F (Falso) ou V (Verdadeiro): ( V ) ESBL, KPC e AmpC são tipos de enzima betalactamase que podem ser produzidas pelas Enterobactérias. ( V ) A resistência a Vancomicina para Staphylococcus aureus e Enterococcusdeve ser confirmada sempre por métodos quantitativos. ( V ) Um inóculo pesado – turvação superior a escala 0,5 Mac Farland traduz uma resistência falsa no antibiograma. ( F ) Para realizar o antibiograma não é necessário estar com a bactéria pura. 14. O antibiograma apresenta como objetivos a identificação e a análise do perfil e da sensibilidade de bactérias isoladas a um painel de antibióticos. Esse exame é realizado em culturas de material obtido em diversas áreas do organismo que tenham apresentado crescimento bacteriano. Existe também a possibilidade de utilização do antibiograma automatizado, que fornece a concentração inibitória mínima de antibiótico para determinada bactéria. Na realização do antibiograma podemos afirmar que: a) por difusão de discos, caso ocorra crescimento de bactérias hemolíticas, a leitura deve ser realizada na zona de hemólise, selecionando-se a área de maior lise. b) por difusão de discos, todo crescimento no halo de inibição deve ser ignorado, não sendo tais bactérias subcultivadas. c) por difusão de discos, após inoculação e período de incubação, devem ser checados a característica do crescimento e o padrão das zonas de inibição ao redor dos discos, usando-se um paquímetro ou halômetro ou régua. d) automatizado, o inóculo deverá ser preparado a partir de colônias confluentes para que sejam levados em conjunto todos os agentes que cresceram na placa de isolamento primário. e) automatizado, a grande desvantagem se relaciona à impossibilidade de uma abordagem quantitativa da sensibilidade dos micro-organismos isolados. 15. Com relação aos testes de sensibilidade aos antimicrobianos, considere as seguintes afirmativas: 1. Para antibiograma pelo método de difusão de discos em ágar, o inóculo bacteriano deve ser realizado a partir de uma suspensão bacteriana padronizada, como na escala 1,5 de McFarland. 2. O antibiograma por métodos de diluição tem como objetivo determinar a concentração do antimicrobiano que inibe visivelmente o crescimento bacteriano. 3. A concentração inibitória mínima é a menor concentração de um antimicrobiano que elimina totalmente os micro- organismos. 4. Antibiograma pelo método da difusão de discos, segundo Kirby-Bauer, tem como objetivo avaliar quantitativamente a concentração bactericida de um antimicrobiano. 5. O método de microdiluição em caldo é o teste recomendado quando se deseja um resultado qualitativo. Assinale a alternativa CORRETA. a) Somente a afirmativa 2 é verdadeira. b) Somente as afirmativas 1, 2 e 3 são verdadeiras. c) Somente as afirmativas 1, 4 e 5 são verdadeiras. d) Somente as afirmativas 2, 3, 4 e 5 são verdadeiras. e) Somente as afirmativas 1, 3, 4 e 5 são verdadeiras. 16. A determinação da susceptibilidade aos antimicrobianos (TSA ou antibiograma) é uma das principais tarefas do laboratório de microbiologia clínica, o que exige execução cuidadosa. Sobre esse assunto, analise as afirmativas abaixo: I. Quando as enterobactérias são produtoras da enzima ESBL são resistentes à todas as penicilinas e cefalosporinas, mas não aos carbapenêmicos. II. O teste de antibiograma por difusão de discos fornece uma avaliação quantitativa (Concentração Inibitória Mínima – CIM) da susceptibilidade aos antimicrobianos. III. Os sistemas automatizados têm a vantagem de avaliar todas as diluições de cada antimicrobiano, utilizando os pontos de corte específicos para a categorização da CIM (Concentração Inibitória Mínima). IV. O pH do meio de Mueller Hinton deve estar entre 7,2 e 7,4, e sua espessura, quando distribuído em placas de Petri, deve ser de aproximadamente 4 mm. Assinale a alternativa CORRETA. a) I e III estão corretas b) I e IV estão incorretas c) II e III estão corretas d) II e IV estão incorretas e) I e IV estão corretas.