Biomedicina

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39Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
CAPITULO IV 
BIOQUÍMICA
Geórgia Muccillo Dexheimer
Jairo Luís Hoerlle
Vanderlei Biolchi
A bioquímica é uma ciência que visa ao estudo de biomoléculas, ou seja, moléculas 
envolvidas com a formação e a viabilidade da célula e estuda processos químicos relacionados 
aos organismos vivos.
Esta área de estudo está envolvida significativamente com a estrutura, função e interação 
de macromoléculas biológicas, como proteínas, ácidos nucleicos, carboidratos e lipídios, os 
quais fornecem às células sua estrutura e executam funções para a sua sobrevivência.
ENZIMAS
1. PRÁTICA: Efeito da variação de temperatura na velocidade da reação 
enzimática
Esta prática tem por objetivo identificar a temperatura ideal da enzima e reconhecer 
temperaturas de desnaturação enzimática.
A velocidade de qualquer reação química aumenta, mesmo mantendo fixa a concentração 
dos reagentes, com o aumento da temperatura, por dois motivos, basicamente:
- Aumento dos choques entre as moléculas dos reagentes;
- Aumento do número de ligações intramoleculares que se tornam suscetíveis de 
transformação. 
A energia necessária para que os reagentes ultrapassem o “estado de transição” é 
a energia de ativação da reação. A presença de um catalisador diminui a energia livre de 
ativação. Em uma faixa que varia de zero a 50°C, a velocidade da reação vai aumentando 
até atingir um máximo em torno dos 50°C (ativação térmica). Após este valor a atividade cai 
bruscamente, ocorrendo a inativação progressiva da enzima, por desnaturação.
A maioria das proteínas, incluindo as enzimas, é sensível à desnaturação quando 
submetidas a temperaturas de 40° a 50°C por possuírem um alto coeficiente de desnaturação 
térmica.
40Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Procedimento:
1. Pipetar os tubos conforme esquema a seguir:
Branco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
Temperatura 37 °C Gelo Ambiente 37°C 80°C
Solução padrão de glicose - 0,01 mL 0,01 mL 0,01 mL 0,01 mL
Reagente 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
2. Misturar e incubar os tubos de acordo com suas respectivas temperaturas durante 10 
minutos;
3. Determinar as absorbâncias em 505 nm, ajustando o zero com o branco. 
4. Construir gráfico da temperatura (eixo x) X absorbância (eixo y).
5. Identificar a temperatura ideal da enzima. Discutir a diferença encontrada nos valores 
da absorbância da glicose em cada uma das temperaturas de incubação.
2. PRÁTICA: Efeito da concentração do substrato na velocidade da reação 
enzimática
Esta prática tem como objetivo reconhecer a importância da concentração de substrato 
na atividade enzimática.
Em condições de excesso de cofatores e de enzima, a velocidade da reação enzimática 
é determinada pela concentração do substrato [S]. O aumento da velocidade é diretamente 
proporcional ao [S] para concentrações baixas de substrato. Em altas concentrações de 
substrato, a enzima está saturada e a atividade não depende do [S]. Essa relação se expressa 
por um gráfico hiperbólico quando se mede a variação da velocidade em função do [S]. As 
duas constantes Vmax (velocidade máxima) e Km (Constante de Michaelis-Menten) podem 
ser determinadas experimentalmente. Vmax corresponde à velocidade atingida na saturação 
da enzima pelo substrato. Pode ser expressa como a quantidade de produto formado ou 
substrato consumido na unidade de tempo. Km corresponde à concentração de substrato na 
qual a reação enzimática atinge a metade da velocidade máxima.
Procedimento:
1. Sistema de incubação
Reagentes Branco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7
Sol.glicose 5mg/dL - 0,02 mL - - - - - -
Sol.glicose 10mg/dL - - 0,02 mL - - - - -
Sol.glicose 25mg/dL - - - 0,02 mL - - - -
Sol.glicose 50mg/dL - - - - 0,02 mL - - -
Sol.glicose 100mg/dL - - - - - 0,02 mL - -
Sol.glicose 200mg/dL - - - - - - 0,02 mL -
Sol.glicose 400mg/dL - - - - - - - 0,02 mL
Reagente colorimétrico 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL
Absorbância
2. Misturar e incubar os tubos a 37ºC por 10 minutos;
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BIOQUÍMICA
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	Jairo Luís Hoerlle
	Vanderlei Biolchi