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135Biomedicina na prática: da teoria à bancada SUMÁRIO CAPÍTULO X BACTERIOLOGIA Geórgia Muccillo Dexheimer Jairo Luís Hoerlle Johan Prediger A Bacteriologia Clínica tem como objetivo isolar e identificar bactérias de importância clínica, bem como avaliar os seus perfis de susceptibilidade aos antimicrobianos. O valor clínico tem grau de dependência com o sítio anatômico a partir do qual a bactéria foi isolada, sendo necessário avaliar se a mesma está infectando, colonizando ou se faz parte da microbiota normal do local em estudo. TÉCNICAS DE IDENTIFICAÇÃO E PERFIL DE SUSCEPTIBILIDADE PARA BACTERIOLOGIA CLÍNICA A patogenicidade das bactérias está na capacidade que elas têm de causar infecções e está intimamente relacionada com o local (sítio) onde estão presentes. Em diversos sítios anatômicos existem bactérias que são consideradas da microbiota normal podendo inclusive atuar na defesa do local, oprimindo o crescimento de bactérias contaminantes ou ainda colonizando de forma saprófita. Em raras exceções, porém, estas bactérias podem causar uma infecção. A resistência bacteriana a diferentes antimicrobianos tem se tornado um problema mundial, uma vez que diminui as possibilidades de tratamento, leva a um aumento no tempo de internação, nas taxas de morbidade e mortalidade dos pacientes e nos custos terapêuticos. O reconhecimento correto do microrganismo responsável pelo quadro infeccioso e a indicação de um medicamento eficiente para tratamento é de extrema importância para o bem-estar do paciente. Além disso, evita que antimicrobianos sejam utilizados de maneira indiscriminada e incorreta, podendo levar ao desenvolvimento e à disseminação da resistência microbiana. A realização correta das práticas em um laboratório de Bacteriologia é de fundamental importância para o combate das infecções bacterianas. O avanço da medicina moderna e a maior eficácia no tratamento de infecções possibilita um aumento na qualidade de vida da população, bem como contribui para a diminuição da possibilidade de infecções associadas a comorbidades. Observações importantes: No laboratório de Bacteriologia Clínica, o usuário deve ter dois cuidados imprescindíveis: 1. Não se contaminar com as amostras. Para isso, deve-se fazer uso de todos os EPIs necessários, lembrando-se sempre que o manuseio de amostras patogênicas pode levar a um alto risco de contaminação. 2. Manter o material clínico íntegro. O material deve ser preservado sem modificações para que não ocorram alterações que modifiquem os resultados reais. Antes de qualquer procedimento ser realizado na bancada, deve-se ter conhecimento e seguir as normas do laboratório. Adicionalmente deve-se: 136Biomedicina na prática: da teoria à bancada SUMÁRIO 1. Lavar as mãos; 2. Colocar as luvas, jaleco e máscara; 3. Desinfetar a superfície com álcool; 4. Acender a chama do bico de Bunsen; 5. Realizar todo o procedimento próximo à chama; 6. Desligar a chama após a realização do procedimento; 7. Desinfetar a superfície com álcool novamente; 8. Lavar as mãos e realizar a antissepsia com álcool. 1. Preparo de Meios de Cultura 1.1. Produção de ágar Chocolate Meio de Ágar Chocolate é amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora seja possível o crescimento de quase todos os tipos de microrganismos. Importante para o crescimento de microrganismos exigentes como: Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, fazendo com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes. Observação: Se utilizar sangue de carneiro ou coelho no lugar do sangue de cavalo, adicionar os suplementos à base de NAD (coenzima I) e cisteína após resfriar a base achocolatada à aproximadamente 50ºC. Materiais: - Álcool 70%; - Luvas; - Bico de Bunsen; - Alça de inoculação; - Jaleco; - Sabonete líquido; - Máscaras; - Autoclave; - Copo Becker; - Placas de Petri; - Pipetas de vidro ou descartáveis; - Proveta; - Estufa bacteriológica; - Meios comerciais: BHI Ágar, Columbia Ágar Base, Blood Ágar Base, Mueller Hinton Ágar; - Sangue de cavalo, carneiro ou coelho desfibrinado; CAPÍTULO X BACTERIOLOGIA Geórgia Muccillo Dexheimer Jairo Luís Hoerlle Johan Prediger