Biomedicina

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25Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
- Identificar cada frasco;
- Colocar na estufa, a 37ºC.
4. 44 horas após preparo da amostra, realizar o bloqueio da Citocinese adicionando 
0,2 mL citocalasina B;
5. Recolocar, novamente, o frasco na estufa a 37ºC;
6. 72 horas após preparo da amostra, proceder da seguinte forma:
- Transferir cada cultura para um tubo Falcon de vidro, previamente identificado; 
- Centrifugar a 1.500 rpm por 7 minutos, cuidando o balanceamento;
- Ao término da centrifugação, desprezar o sobrenadante com a Pasteur;
- Adicionar 4 gotas de formalina em cada amostra;
- Agitar cada amostra com o vortex;
- Colocar as amostras em banho Maria a 37ºC por 5 min;
- Adicionar 4 mL de citrato de sódio;
- Logo em seguida, ressuspender com a pipeta pauster especifica da amostra;
- Colocar as amostras em banho Maria a 37ºC por 7 min;
- Adicionar 0,5mL de fixador Carnoy;
- Logo em seguida, ressuspender com a pipeta pauster especifica da amostra;
- Centrifugar a 1.500 rpm por 7 minutos;
- Desprezar o sobrenadante com a pipeta Pasteur;
- Adicionar 5 mL de fixador e ressuspender;
- Centrifugar a 1.500 rpm por 7 minutos;
- Desprezar o sobrenadante com a pipeta Pasteur;
- Estocar em congelador ou geladeira por, no mínimo, 15 minutos;
- Durante este tempo, realizar a preparação das lâminas:
- Retirar as lâminas do álcool 70% e colocá-las dispostas em cubetas, sob água 
corrente da torneira, para remover o álcool;
- Remover toda a água e preencher a cubeta com água destilada;
- Retirar as amostras da geladeira, centrifugar a 1.500 rpm por 7 minutos e desprezar 
o sobrenadante;
- Adicionar 5 mL de fixador e ressuspender;
- Centrifugar a 1.500 rpm por 7 minutos e desprezar o sobrenadante;
- Se necessário, realizar essas lavagens até a amostra obter aparência límpida, clara, 
translúcida;
- Na última lavagem, ao desprezar o sobrenadante cuidar para manter
aproximadamente 1 mL (aproximadamente na medida de 2 dedos)
- Ressuspender a amostra, contendo agora, apenas 1 mL.
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da teoria à bancada SUMÁRIO
7. Após este procedimento, deve-se realizar a coloração da seguinte forma: 
- Pingar na lâmina 3 a 4 gotas do material;
- Deixar secar em temperatura ambiente;
- Preparar a solução de Giemsa;
- Preencher toda a lâmina com a solução de Giemsa 20%;
- Deixar agir por 5 min (máximo 7min);
- Desprezar o corante em água corrente abundante;
- Desprezar o excesso de água batendo a lâmina lateralmente em papel absorvente;
- Deixar secar em temperatura ambiente.
8. Proceder a análise em microscópio óptico, analisando de 1000 a 2000 células 
binucleadas.
9. Fazer um escaneamento em zigue-zague por toda a lâmina em aumento de 400x;
10. Verificar com o aumento de 1000x em imersão a presença de alteração nuclear.
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