Biomedicina

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23Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
1/16 e 1/3 do diâmetro dos núcleos principais. A formação de MN é indubitavelmente um 
mecanismo da perda de cromossomo, apesar deste não ser o único mecanismo. Acredita-se 
que estas estruturas também possam ser formadas na fase S da replicação celular, através da 
amplificação gênica, projetando “buds” nucleares, os quais possivelmente serão cortados após 
a telófase. Esta técnica possibilita também a quantificação das pontes nucleoplasmáticas, que 
são cromossomos dicêntricos que tiveram os centrômeros puxados para os polos opostos da 
célula em anáfase.
1. PRÁTICA: Frequência de micronúcleos em linfócitos humanos
Materiais:
- Luvas;
- Jaleco;
- Soro fetal bovino;
- RPMI- meio de cultura
- Fitohemaglutinina
- Formalina;
- Citocalasina B;
- Citrato de sódio a 1%;
- Fixador Carnoy
- PBS;
- Lâminas;
- Lamínulas;
- Erlenmeyer;
- Provetas;
- Pipetas automáticas;
- Ponteiras;
- Solução de Giensa a 20%;
- Centrífuga;
- Água destilada;
- Frascos para armazenar soluções;
- Estufa;
- Medidor de pH;
- Micro-ondas;
- Microscópio óptico;
- Banho-maria;
- Microtubos eppendorf;
- Pipetas Pasteur;
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- Capela de fluxo laminar;
- Tubo falcon;
- Agitador de tubos tipo vórtex.
1. Soluções usadas: 
- Soro bovino fetal: Meio nutritivo celular que contém substratos 
- RPMI 1640: Meio de cultura específico para linfócitos T
- Fitohemaglutinina: Induz a mitose dos linfócitos T
- Citocalasina B: Interrompe a citocinese durante a anaphase.
- Formalina a 1%: Conserva amostras biológicas.
- Citrato de Sódio a 1%: Estabiliza proteínas.
- Fixador Carnoy: Misturar 3 partes de methanol e uma parte de ácido acético: Retira 
os resíduos de hemácias da amostra de linfócitos e fixa o material na lâmina
- Solução de Giemsa 20% em PBS: Coloração da amostra.
Preparar o Tampão fosfato (PBS):
8 g NaCl
0,2g KCl
1,44g Na2HPO4
0,24g KH2PO4
Adicionar água destilada até completar 1000mL.
Ajustar pH 7,4 com HCl.
2. Pré-preparo das lâminas:
Dicas: 
• Utilizar sempre lâminas novas, de preferência com tarja fosca.
• Lavar cada uma com detergente (para retirar a gordura).
• Estocar em álcool 70% dentro da geladeira até o uso.
3. Cultivo e Processamento:
- Coletar 4 mL de sangue em tubo heparinizado;
- Limpar a Capela de Fluxo Laminar com álcool 70%;
- Ligar a lâmpada UV por 20 minutos;
- Em cada frasco, colocar:
• 5 mL de RPMI 1640;
• 1 mL de soro bovino fetal;
• 0,1 mL de fitohemaglutinina;
• 0,8 mL de sangue total ou 0,5 mL de concentrado de leucócitos.