PRÁTICO 11- TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE GRAM

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FACULDADE DE CIENCIAS BIOLOGICAS 
G RADUAÇAO EM BI O TECNO LOG I A - BACHARELADO 
DISCIPLINA DE BIOLOGIA CELULAR 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEMA: ESTRUTURA DAS 
BACTÉRIAS 
PRÁTICO 11: TÉCNICA DE 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Discente: Michele Poliana Gomes-P1 
Docente: Marcos Gino Fernandes 
 
 
 
 
 
UFGD -MS 
2024
 
INTRODUÇÃO: 
As bactérias são organismos procarióticos, ou seja, não possuem um 
núcleo definido e outras organelas membranosas. Essas células são 
envolvidas por uma parede celular rígida que varia em composição química, 
determinando diferentes características estruturais e funcionais. A parede 
celular é um dos principais alvos de estudos microbiológicos, pois sua 
composição influencia diretamente na resposta das bactérias a diferentes 
tratamentos antibacterianos (MADIGAN et al., 2015). 
A técnica de coloração de Gram, desenvolvida por Hans Christian Gram 
em 1884, é uma das metodologias mais fundamentais e amplamente utilizadas 
na microbiologia para a classificação de bactérias. Esta técnica permite 
distinguir entre dois grandes grupos bacterianos: Gram-positivas e Gram-
negativas. A diferenciação baseia-se nas propriedades físicas e químicas das 
paredes celulares, que respondem de maneira distinta aos corantes utilizados 
no procedimento (BARER, 2007). 
No procedimento da coloração de Gram, as bactérias são 
primeiramente fixadas em uma lâmina de vidro. Em seguida, aplica-se cristal 
violeta, que é um corante primário. Após a aplicação de um mordente, 
geralmente o lugol, as células são tratadas com um agente descolorante, 
como álcool ou acetona. Bactérias Gram-positivas retêm o cristal violeta 
devido à sua espessa camada de peptidoglicano, enquanto as Gram-
negativas, com uma camada de peptidoglicano mais fina e uma membrana 
externa adicional, perdem a coloração inicial e são então coradas com um 
corante de contraste, como a safranina (HARVEY et al., 2007). 
A identificação correta de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas é 
crucial para o diagnóstico clínico e para a escolha de terapias antimicrobianas 
adequadas. Bactérias Gram-positivas incluem patógenos importantes como 
Staphylococcus aureus e Streptococcus pneumoniae, enquanto bactérias 
Gram-negativas incluem Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Cada 
grupo possui sensibilidades diferentes a antibióticos, tornando a coloração de 
Gram um passo essencial na microbiologia clínica (LEVINSON, 2014). 
A técnica de coloração de Gram, apesar de sua simplicidade, 
proporciona uma base para diversas aplicações microbiológicas, desde a 
 
pesquisa básica até a prática clínica. A habilidade de classificar rapidamente 
as bactérias em Gram-positivas ou Gram-negativas é fundamental não apenas 
para o diagnóstico e tratamento de infecções, mas também para o 
desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas e a compreensão das 
dinâmicas ecológicas das populações bacterianas (GREENWOOD et al., 
2002). 
 
OBJETIVOS: 
• Analisar como as células eucarióticas e procarióticas reagem à 
coloração de Gram; 
• Estudar a morfologia dos procariontes 
 
MATERIAIS: 
• Espátula de madeira; 
• Lâmina e lamínula; 
• Cristal violeta; 
• Lugol; 
• Safranina; 
• Álcool; 
• Cronômetro ou relógio; 
• Conta-gotas ou pipeta de pasteur; 
• Papel filtro; 
 
PROCEDIMENTO A: 
• Logo após o bochecho, células da mucosa bucal foram retiradas, 
raspando-a com uma espátula de madeira. 
• O material colhido foi transferido para uma lâmina de microscopia. 
• O palito foi deslizado sobre a lâmina, de modo que o material colhido 
ficasse na porção central da mesma, preparando-se assim um esfregaço. 
• A lâmina foi deixada secar, balançando-a no ar para acelerar o processo 
 
de secagem. 
• A coloração foi realizada adotando os seguintes passos: 
a. Corar com cristal violeta: 2 gotas por 1 minuto; em seguida, lavar com 
água. 
b. Corar com lugol: 2 gotas por 1 minuto; em seguida, lavar com água. 
c. Acrescentar álcool: 2 gotas por 30 segundos; em seguida, lavar com água. 
d. Corar com safranina: 2 gotas por 1 minuto; em seguida, lavar com água. 
e. A lamínula foi colocada sobre a lâmina, que foi então levada ao 
microscópio para observação. 
• Esquematizou-se os desenhos nas ampliações de 40x 100x 400x e 
1000x. 
• RESULTADO: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
40x 100x 
 
 
 
 
 
400x 1000x 
 1-Gram negativo (sendo mais nítido) 
 2- Gram positivo (não sendo tao nítido como as Gram negativas) 
 
 
 
 
Discussão: 
1. Pela classificação de Gram, quais tipos de células foram 
observados? 
Na classificação de Gram, foram observadas células Gram-
positivas e Gram-negativas. As células Gram-positivas apresentam 
uma coloração roxa ou azul escura após o processo de coloração, 
enquanto as Gram-negativas aparecem em uma coloração rosa ou 
vermelha. 
2. Qual a diferença observada entre as células Gram-
positivas e Gram-negativas após a aplicação da bateria de 
1 
2 
 
corantes? 
Após a aplicação da bateria de corantes, as células Gram-
positivas mantêm a coloração roxa do cristal violeta devido à sua 
espessa camada de peptidoglicano, que retém o corante. Em contraste, 
as células Gram-negativas perdem a coloração inicial com a aplicação 
do álcool e são coradas pela safranina, apresentando-se em cor rosa 
ou vermelha. 
3. A que se deve a diferença observada entre os dois tipos 
de bactérias coradas pelo método de Gram? 
A diferença observada deve-se à estrutura da parede celular das 
bactérias. As bactérias Gram-positivas possuem uma camada espessa 
de peptidoglicano, que retém o cristal violeta mesmo após a 
descoloração com álcool. Já as bactérias Gram-negativas têm uma 
camada de peptidoglicano mais fina e uma membrana externa adicional 
que permite a saída do cristal violeta e a subsequente coloração pela 
safranina. 
4. Qual a função de cada corante e do álcool na técnica de 
coloração de Gram? 
- Cristal Violeta:** Corante primário que penetra e colore todas 
as células. 
- Lugol (mordente):** Forma um complexo com o cristal violeta, 
fixando-o nas células. 
- Álcool ou Acetona:** Agente descolorante que desidrata a 
parede celular das Gram-positivas, fixando ainda mais o corante, e 
dissolve a membrana externa das Gram-negativas, removendo o cristal 
violeta. 
- Safranina:** Corante de contraste que colore as células Gram-
negativas, permitindo sua visualização. 
5. Qual a importância prática de classificar as bactérias em 
 
Gram-positivas e Gram-negativas? 
Classificar as bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas é 
crucial para o diagnóstico clínico e para a escolha de terapias 
antimicrobianas adequadas. Essa classificação ajuda a identificar 
rapidamente o tipo de bactéria envolvida em uma infecção, orientando 
o tratamento com antibióticos específicos e apropriados para cada tipo 
de bactéria. 
6. Como é feito e qual é o objetivo do esfregaço? 
O esfregaço é feito espalhando uma pequena quantidade de 
amostra bacteriana sobre uma lâmina de vidro, fixando-a com calor ou 
álcool. O objetivo do esfregaço é criar uma camada fina e uniforme de 
bactérias para facilitar a observação microscópica e garantir que as 
células fiquem fixas na lâmina durante o processo de coloração. 
7. Justifique por que ocorre a diferenciação de coloração 
entre as duas células: bacteriana positiva e eucarionte da mucosa 
bucal. 
A diferenciação de coloração ocorre devido às diferenças 
estruturais das paredes celulares. As células bacterianas Gram-
positivas possuem uma camada espessa de peptidoglicano que retém 
o cristal violeta. As células eucariontes da mucosabucal, por outro lado, 
não têm parede celular de peptidoglicano, fazendo com que não 
retenham o cristal violeta da mesma forma e possam ser coradas de 
maneira diferente. 
8. Ao se observar uma célula eucarionte animal, por que as 
bactérias Gram-negativas (após coloração de Gram) não se 
mostram tão evidenciadas/distintas quanto as bactérias Gram-
positivas? 
As bactérias Gram-negativas, após a coloração de Gram, não se 
mostram tão evidenciadas quanto as Gram-positivas devido à sua 
camada mais fina de peptidoglicano e à presença de uma membrana 
 
externa que permite a saída do cristal violeta com mais facilidade 
durante o processo de descoloração. Isso resulta em uma coloração 
menos intensa comparada às Gram-positivas, que retêm o corante 
primário de maneira mais eficaz. 
Conclusão: 
A técnica de coloração de Gram é essencial para a classificação e 
identificação de bactérias na microbiologia. Durante o experimento, observou-se 
que as bactérias Gram-positivas retêm a coloração roxa do cristal violeta devido 
à sua espessa camada de peptidoglicano, enquanto as Gram-negativas, com 
uma camada de peptidoglicano mais fina e uma membrana externa adicional, 
perdem essa coloração e são coradas de rosa ou vermelho pela safranina. 
Essa diferenciação é crucial na prática clínica, pois ajuda na escolha de 
terapias antimicrobianas adequadas. A técnica permite distinguir rapidamente 
entre bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, auxiliando no diagnóstico de 
infecções e na determinação do tratamento correto. 
O procedimento experimental seguiu etapas específicas para garantir 
resultados claros e precisos, desde a preparação do esfregaço até a aplicação 
dos corantes. Cada passo desempenhou um papel importante na visualização 
das células. 
Em resumo, a coloração de Gram é uma ferramenta indispensável na 
microbiologia, proporcionando uma compreensão clara das estruturas 
bacterianas e suas implicações clínicas 
Referencias: 
BARER, M. Medical Microbiology. Garland Science, 2007. 
GREENWOOD, D.; SLACK, R.; PEUTHERER, J. Medical Microbiology. 
Churchill Livingstone, 2002. 
HARVEY, R.A.; CHAMPE, P.C.; FISHER, B.D. Microbiologia Ilustrada. 
Artmed, 2007. 
 
LEVINSON, W. Review of Medical Microbiology and Immunology. 
McGraw-Hill Education, 2014. 
MADIGAN, M.T.; MARTINKO, J.M.; BENDER, K.; BUCKLEY, D.; STAHL, 
D. Brock Biology of Microorganisms. Pearson, 2015.