Salicemia - 09 06 21

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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA (HABILIDADES OU LABORATORIAL)	
	Tema do Treino de Habilidades ou Prática Laboratorial
	Dosagem de Salicemia
	Data
	09/06/2021
	Local onde acontecerá a aula prática
	Laboratório Multidisciplinar
	Tempo de duração da aula prática
	90 minutos
	Horário
	9 – 12
	Curso
	Biologia
	Turma
	5MA
	Nº de Alunos previsto
	
	Docente
	
	Disciplina
	
	Observações Relevantes sobre a turma: 
	I. Objetivos de Aprendizagem
	1. Entender como realizar a dosagem de um toxicante numa amostra
2. Aprender a criar uma curva de calibração de espectrofotômetro
3. Aprender a utilizar um espectrofotômetro
4. Compreender a relação entre absorbância e concentração
	II. Materiais Necessários 
	Materiais e reagentes
Reagentes na bancada 1 (ao lado das balanças)
- Cloreto de Ferro III – 17 g/L em meio ácido, abaixo modo de preparo:
 -> Solubiliza 1,7 g em 80 ml de agua
 -> Adiciona 12 ml de HCl
 -> completar o volume pra 100 ml
- Ácido salicílico 1 mg/mL
Materiais nas bancadas dos grupos
· 6 Tubos de ensaio;
· 1 pincel para marcação
- Pipeta Graduada de 5 mL (01)
- Pipeta Graduada 1 mL (03)
- Pipetador (01)
Equipamentos
- Espectrofotômetro com leitura a 540 nm
	III. Organização do Ambiente
	Organizar de forma que cada bancada tenha reagente suficiente para o procedimento e tenha uma solução 
	IV. Objetivos e Check-List das estações de Aprendizagem
	Objetivo da Estação 1 de Aprendizagem:
Realizar a Paramentação para o experimento
	Check-list da Estação 1 de Aprendizagem: 
1. Lavar as mãos e colocar os EPIS para manusear as vidrarias e balanças.
2. Confira cada material distribuído em sua bancada.
3. Leia todo o Roteiro que foi recebido para se preparar para os experimentos.
	Objetivo da Estação 2 de Aprendizagem:
Preparo da curva de calibração do Salicilato
	Check-list da Estação 2 de Aprendizagem:
1. Encontrar a solução 1 mg/mL de salicilato.
2. Marcar os tubos com a concentração referente aquele tubo
3. Adicionar o volume de salicilato utilizando a pipeta adequada.
4. Adicionar o volume de água, utilizando a pipeta adequada para completar o volume para 3 mL
5. Adicionar 1 ml de reagente nos tubos.
6. Agitar por alguns segundos
7. Ler os tubos no espectofotômetro a 540 nm.
8. Anotar a absorbância.
Tabela de concentrações do controle
	Ponto da curva
	Volume do padrão (mL)
	Volume de água (mL)
	Volume de Reagente (mL)
	0
	0
	3
	1
	1
	1
	2,0
	1
	2
	2
	1,0
	1
	3
	3
	0
	1
	Objetivo da Estação 3 de Aprendizagem:
Dosar amostra desconhecida
	Check-list da Estação 3 de Aprendizagem:
1. Encontrar a solução desconhecida de salicilato.
2. Marcar o tubo teste, identificando-o
3. Completar o volume do tubo se necessário, para 3 mL
4. Adicionar 1 mL de reagente ao tubo.
5. Agitar por alguns segundos
6. Ler os tubos no espectofotômetro a 540 nm.
7. Anotar a absorbância.
8. Comparar a absorbância com a curva controle
	V. Instruções à turma
	Instruções para Estação 1 de Aprendizagem
	
O Laboratório é um lugar de experimentação onde os acadêmicos terão a oportunidade de aprender toxicologia de um ponto de vista que nunca poderiam atingir por intermédio de livros, demonstrações ou filmes; é a possibilidade de alcançar maior compreensão da Ciência a oportunidade de ver e trabalhar com as próprias mãos. Técnicas de toxicologia experimental não são objetivos, mas sim os instrumentos que nos permitem atingir a meta final, que é extrair informações úteis a partir de observações práticas, aprendendo o manuseio de compostos e a manipulação de aparelhos, que é obviamente, uma parte essencial à educação dos profissionais das áreas de Ciências Exatas, Ciências da Saúde e Ciências Biológicas.
	Instruções para Estação 2 de Aprendizagem
	O ácido acetilsalicílico é um fármaco do grupo dos antiinflamatórios não-esteroides (AINE) utilizado como antiinflamatório, antipirético, analgésico e também como antiplaquetário. Um dos medicamentos mais famosos à base de ácido acetilsalicílico é o AAS, que é utilizado como analgésico, inclusive para cefaléias, como antipirético e também como antiinflamatório no tratamento da artrite reumatóide, osteoartrite, febre reumática e outras condições semelhantes. Também inibe a agregação plaquetária, prevenindo a formação de trombos, com várias indicações para o combate de doenças cardiovasculares tais como a prevenção do infarto do miocárdio, angina instável e outros estados de isquemia cardíaca e eventos trombóticos no cérebro. Todavia, variações na concentração orgânica do fármaco podem resultar em intoxicação ou efeito subterapêutico. Como causas relacionadas a esses problemas, podemos citar: mudanças no regime farmacoterápico; interações medicamentosas com alterações nos parâmetros cinéticos do paciente e, ainda, uso prolongado ou em altas doses do fármaco. A intoxicação aguda por salicilatos é mais freqüente em crianças por ingestão acidental; em adultos, ocorrem por tentativas de suicídio. A dose fatal é estimada em 200 a 50o mg/kg. Crianças menores de três anos são mais suscetíveis do que adultos às ações tóxicas dos salicilatos . A dose letal média de AAS por via oral é de 20 a 30 gramas em adultos; efeitos tóxicos aparecem quando to g ou mais são ingeridos em dose única ou divididos, num período de 12 a 24 horas. Efeitos tóxicos não são comuns com níveis séricos inferiores a 3o mg/dL. e. A determinação dos níveis de salicilatos pode ser feita por um método analítico de baixo custo, exatidão e precisão adequadas, a saber, o método de Trinder, o qual se utiliza da técnica de espectrofotometria na região do visível. Em tal procedimento analítico, a concentração do ácido salicílico (produto de biotransformação do ácido acetilsalicílico) está diretamente relacionada à intensidade da coloração violeta do complexo formado entre o salicilato e o íon férrico oriundo do reagente cromogênico
Procedimento: Preparação da solução da curva de calibração de Salicilato:
· Identificar os tubos que serão usados
· Identificar na tabela quanto de cada solução você vai precisar
· Preparar os tubos com a curva de calibração
· Agitar e depois centrifugar os tubos.
· Ler a 540 nm no espectofotômetro
	Instruções para Estação 3 de Aprendizagem
	Utilizando o reagente de trinder, a quantidade do complexo formado é diretamente proporcional à quantidade do analito (ácido salicílico) presente na amostra, posto que a quantidade de reagente seja fixa. Esse complexo corado é quantificado pela medida da absorbância da luz em 540 nanômetros, que atravessa o tubo de ensaio com a amostra adicionada de reagente, em comparação com uma solução-padrão em concentração conhecida, também adicionada de reagente. A eficácia do método de Trinder para determinação da salicilemia entre usuários crônicos de AAS tem sido comprovada por estudos diversos. Os resultados foram concordantes, mostrando a eficácia do emprego do método de Trinder para a monitorização terapêutica do AAS. Outros elementos influentes na escolha desse método são: o fato deste ser muito simples, rápido, pouco oneroso, de fácil execução e, sobretudo, de eficácia analítica adequada ao propósito.
	VI. Instruções para reflexão
	
	
1 – Utilizando as concentrações e absorbâncias, prepare um gráfico relacionando todos os tubos.
2 – Qual a relação entre cor e concentração de salicilato?
3 – Qual a concentração de padrão (obtidos na estação 2) está mais próxima da concentração da sua amostra teste quando comparamos as absorbâncias?
4 – Sobre o método, qual sua opinião sobre o método e quais foram as maiores facilidades e dificuldades que você teve durante todo o experimento?