Dosagem de hemoglobina

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Dosagem de 
hemoglobina 
 
 
Teste 
 Realizado por meio de um kit da bioclin 
 Vem 2 reagentes um que seria o padrão, 
para comparar os resultados (ver se você 
fez o procedimento da maneira corretado) e 
o outro reagente (o que será usado no teste 
de dosagem de hemoglobina). 
Finalidade 
Determinação de hemoglobina por meio de um 
teste colorimétrico ( vai haver a mudança de 
cor e você vai medir essa mudança por meio da 
espectrofotometria) 
A olho nu: 
 Claro- baixa concentração 
 Escuro- maior concentração 
 Teste In vitro 
Princípios de ação 
Utilizar luvas e jaleco comprido até o pulso. 
A cianometahemoglobina vai ser formada nesse 
processo e quando ela for formada ela vai 
mudar de cor e vai se tornar avermelhada. 
 O ferricianeto de potássio vai oxidar o 
ferro presente na hemoglobina e vai formar 
a metahemoglobina, 
 A metahemoglobina vai reagir com o cianeto 
de potássio e formar a 
cianometahemoglobina 
Componentes do Reagente 
 Reagente de cor-estoque (contém tampão 
fosfato (para manter o ph), ferricianeto de 
potássio, cianeto de potássio e surfactante 
(para impedir a perda de água durante o 
processo) 
Amostra 
Amostras que se podem utilizar: 
 Para a dosagem de hemoglobina pode se 
utilizar o sangue total obtido livre de 
hemólise nesses 3 tubos: 
 Tubo da tampa roxa- colhido com EDTA 
(anticoagulante irreversível) - para o 
hemograma do paciente. 
 Tubo da tampa azul – citrato (pode tirar o 
citrato depois para fazer ensaio de 
coagulação pra ver se o paciente está 
coagulando normalmente). 
 Tubo cinza- tubo de fluoreto de sódio- 
impede a glicólise- dosagem de glicemia 
Preparo do reagente de trabalho 
Como se preparar o reagente: 
 Dilui o reagente em 1 litro de água- usa 
um balão volumétrico 
 Coloca primeiro 500 ml de água, depois 
acrescenta o reagente e espera 
homogeneizar e depois coloca os outros 
500ml de água. 
Técnica 
Faz em triplicata e tira a média. 
 Coloca 2,5 ml de reagente de trabalho 
no tubo e 10 microlitros de sangue total. 
 Espera homogeneizar e aguarda 5 
minutos. 
 Depois faz a leitura no bioplus a 540 nm. 
 Cálculos 
Fator de calibração = Concentração do padrão 
 Absorbância do padrão 
Hemoglobina (g/dL) = absorbância da amostra x 
fator de calibração 
A concentração do padrão de hemoglobina é de 
10 g/dL Valores de Referência: 
 Homens: 12,5 a 17,5 g/dL Mulheres: 11,5 a 15,5 
g/dL.