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IDENTIFICAÇÃO DE PATÓGENOS POR PCR JOÃO VITOR FALEIROS BARROS TURMA 103 BIOQUÍMICA O QUE É A PCR? HISTÓRICO E USO ❑ DESENVOLVIDO EM 1983 POR KARY MULLIS ❑ NOBEL DE QUÍMICA EM 1993 ❑ MÉTODO MAIS UTILIZADO PARA ESTUDO DE DNA NA BIOLOGIA MOLECULAR O QUE É A PCR? ESCOLHA DO PRIMER: HTTP://WWW.INSDC.ORG/ http://www.insdc.org/ O QUE É A PCR? FASES DA PCR ❑ DESNATURAÇÃO (96°C) ❑ ANELAMENTO (55-68°C) ❑ EXTENSÃO (72°C) ELETROFORESE EM GEL ❑ VISUALIZAR RESULTADOS ❑ DETERMINAÇÃO DO TAMANHO DA AMOSTRA DE DNA PCR EM TEMPO REAL (RT-PCR) ❑ QUANTITATIVO E AUTOMATIZADO ❑ SYBR GREEN E TAQMAN PROBE ❑ DÁ AGILIDADE, PRECISÃO E SEGURANÇA PCR EM TEMPO REAL (RT-PCR) ❑ MAIS SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE ❑ PREÇO RELATIVAMENTE BARATO ❑ EQUIPAMENTO -> R$ 100.000 USOS DO PCR ❑ SEQUENCIAMENTO ❑ CLONAGEM EM PLASMÍDEO ❑ CIÊNCIA FORENSE ❑ TESTES GENÉTICOS ❑ IDENTIFICAÇÃO DE PATÓGENOS IDENTIFICAÇÃO DE PATÓGENOS ❑ PATÓGENO PRESENTE = AMPLIFICAÇÃO ❑ RÁPIDO ARTIGO 1 IDENTIFICAÇÃO DE PATÓGENOS ❑ MÉTODO MAIS PRECISO PARA ALGUNS PATÓGENOS ❑ RÁPIDEZ E SENSIBILIDADE X DESCOBRIR NOVOS MICROORGANISMOS E TESTAR ANTIBIÓTICOS ❑ DEPENDE DA SITUAÇÃO E CUSTO- BENEFÍCIO ARTIGO 2 ARTIGO 3 IDENTIFICAÇÃO DE PATÓGENOS ❑ NÃO PRECISA DE MICROORGANISMOS BIOLOGICAMENTE VIÁVEIS ❑ NÃO PRECISA DE CULTURA OU IDENTIFICAÇÃO POR ANTICORPOS REFERÊNCIAS • KIMBALL, J. W. (2014, MAY 3). PCR. IN KIMBALL'S BIOLOGY PAGES. DISPONÍVEL EM HTTP://WWW.BIOLOGY- PAGES.INFO/P/PCR.HTML. • OPENSTAX COLLEGE, BIOLOGY. (2016, MARCH 23). BIOTECHNOLOGY. EM OPENSTAX CNX. DISPONÍVEL EM HTTP://CNX.ORG/CONTENTS/GFY_H8CU@10.8:EXG4E4AU@7/BIOTECHNOLOGY . • REECE, J. B., TAYLOR, M. R., SIMON, E. J., AND DICKEY, J. L. (2012). DNA PROFILING. EM CAMPBELL BIOLOGY: CONCEPTS & CONNECTIONS (7TH ED., PP 242-246). • REECE, J. B., URRY, L. A., CAIN, M. L., WASSERMAN, S. A., MINORSKY, P. V., AND JACKSON, R. B. (2011). AMPLIFYING DNA: THE POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) AND ITS USE IN DNA CLONING. (10TH ED., PP. 414-416). SAN FRANCISCO, CA: PEARSON. • WILKIN, D. (2016, MARCH 23). BIOTECHNOLOGY AND FORENSIC SCIENCE - ADVANCED. IN CK-12. DISPONÍVEL EM HTTP://WWW.CK12.ORG/BIOLOGY/BIOTECHNOLOGY-AND-FORENSIC-SCIENCE/LESSON/BIOTECHNOLOGY-AND- FORENSIC-SCIENCE-ADVANCED-BIO-ADV/. • INFORMAÇÕES RETIRADAS DE "THE POLYMERASE CHAIN REACTION(ABRE EM UMA NOVA JANELA)(ABRE EM UMA NOVA JANELA)," POR CK-12 FOUNDATION (CC BY-NC 3.0). • CONHECIMENTO BÁSICO RETIRADO DE KHAN ACADEMY. http://www.biology-pages.info/P/PCR.html http://cnx.org/contents/GFy_h8cu@10.8:exg4e4AU@7/Biotechnology http://www.ck12.org/biology/Biotechnology-and-Forensic-Science/lesson/Biotechnology-and-Forensic-Science-Advanced-BIO-ADV/ http://www.ck12.org/book/CK-12-Biology-Advanced-Concepts/section/9.3/ http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/ OBRIGADO PELA ATENÇÃO!