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BACILOS GRAM-POSITIVOS Listeria monocytogenes Bacilos Gram-Positivos • Não formadores de esporos • Existem dois patógenos importantes neste grupo: • Listeria monocytogenes • Corynebacterium diphtheriae Listeria monocytogenes • Características Gerais • Bacilo aeróbio ou anaeróbio facultativo • Gram positivos • Moveis (20ºC a 25ºC) – cambalhotas • Beta hemolíticos – Ágar Sangue • Não formadores de esporos • Desenvolvem-se a temperaturas entre 1 e 45ºC • Amplamente distribuídos na natureza • Toleram teores elevados de sal • Resistem a desidratação • Patogênicos para animais e seres humanos Listeria monocytogenes Imagem 3D Listeria monocytogenes Coloração de Gram Listeria monocytogenes • Sorotipos • O gênero Listeria é construído de 6 espécies • A espécie monocytogenes pode ser dividida em 13 sorotipos, com base nos antígenos somáticos (antígeno S) e flagelar (antígeno H); • Entre esses 13 sorotipos ( 1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a, 3b, 3c, 4a, 4ab, 4b, 4c, 4d, 4e e 7); • A maioria dos casos de Listeriose é provocada pelos sorotipos: • 4b • 1/2a • 1/2b Listeria monocytogenes • Doenças: • Listeriose humana – doença causada pela ingestão de alimentos contaminados por L. monocytogenes. • Surtos de gastrenterite febril • Meningite e sépsis em recém-nascidos, em grávidas e em adultos imunossuprimidos. • Alto índice de mortalidade • A Listeriose é a causa de 38% dos óbitos nos EUA relacionados a doenças de origem alimentar Listeria monocytogenes • Principais fontes de contaminação • O organismo exibe distribuição mundial nos animais, nas plantas e no solo. • A partir desses reservatórios, é transmitido aos humanos principalmente pela ingestão de produtos lácteos não pasteurizados, carnes malcozidas e vegetais crus. • A refrigeração aumenta o crescimento, em virtude de sua capacidade de crescer a 4ºC; • O contato com animais de criação e suas fezes é também uma importante fonte desse organismo. • Nos Estados Unidos, a listeriose é uma doença transmitida principalmente por alimentos, associada à ingestão de queijo não pasteurizado e iguarias de carne. Listeria monocytogenes • Fatores de virulência • É um patógeno intracelular facultativo que tem a capacidade de invadir células de mamíferos e sobreviver no seu interior, incluindo macrófagos, enterócitos e varias outras células eucarióticas; • Internalinas (inlA e inlB) – proteínas responsáveis por intermediar a ligação com a célula do hospedeiro – codificadas por genes (inlA e inlB); • Listeriolisina O – hemolisina (maior e mais importante fator de virulência); • Fosfolipase A - enzima que hidrolisa as ligações éster presentes nos fosfolipídeos (principais constituintes da membrana celular); • ActA - proteína indutora de montagem da actina é uma proteína codificada e usada por Listeria monocytogenes para se propelir através de uma célula hospedeira de mamífero. Listeria monocytogenes • Grupos vulneráveis • As infecções por Listeria ocorrem em duas situações clínicas: • No feto ou recém-nascido como resultado da transmissão transplacentária ou durante o parto; • Mulheres grávidas e adultos imunossuprimidos, especialmente pacientes submetidos a transplante renal. • ATENÇÃO - Gestantes apresentam uma imunidade mediada por células diminuída durante o terceiro trimestre.) Listeria monocytogenes • Mecanismos de patogenicidade • A patogênese de Listeria depende da capacidade de o organismo invadir células e sobreviver no interior delas. • Infecção invasiva localizada ou sistêmica • Infecção não invasiva limitada ao intestino Listeria monocytogenes • Mecanismos de patogenicidade • Ciclo de infecção por L. monocytogenes: 1. No intestino - inicia-se com a adesão da bactéria através da interação das Internalinas (A e B) com um receptor de adesão celular denominado de E.caderina, presente nas células epiteliais humanas, resultando em indução de endocitose (enterócito) ou fagocitose (macrófago) – Fagossomo. 2 - No interior do fagossomo a Listeria produz a Listeriolisina O e varias Fosfolipases que possibilitam o escape da Listeria do fagossomo antes que ocorra a fusão com os lisossomos, impedindo a sua morte intracelular – livre no citoplasma se multiplica. Ciclo de infecção por L. monocytogenes no enterócito Listeria monocytogenes • Mecanismos de patogenicidade • Ciclo de infecção por L. monocytogenes: 3. Livre no citoplasma, outra proteína de superfície de Listeria, ActA, induz a polimerização intracelular da actina; 4. L. monocytogenes desloca-se de uma célula a outra por meio de foguetes de actina, um filamento de actina que se contrai e impulsiona as bactérias através da membrana de uma célula humana a outra. 5. Inicia um novo ciclo de infecção. Esses mecanismos permitem que a Listeria seja transferida diretamente de uma célula para outra sem nenhuma exposição a fatores imunológicos solúveis, como anticorpos e proteínas do complemento. Ciclo de infecção por L. monocytogenes no enterócito Listeria monocytogenes • Mecanismos de patogenicidade • A capacidade da Listeria atravessar a placenta, penetrar nas meninges, e invadir o trato gastrintestinal, depende da interação da internalina com a E.caderina; • Pelo fato de Listeria crescer preferencialmente de modo intracelular, a imunidade mediada por células corresponde a uma defesa mais importante que a imunidade humoral; • A supressão da imunidade mediada por células predispõe a infecções por Listeria – risco para as gestantes. Listeria monocytogenes • Manifestações de importância clínica • Gastroenterite febril • Caracteriza-se por diarreia aquosa, febre, cefaleia, mialgia e cólicas abdominais, porém pouco vômito. • Os surtos são geralmente causados por laticínios contaminados, mas carnes malcozidas, como frango e salsichas, também têm sido envolvidas entre os causadores. Listeria monocytogenes • Manifestações de importância clínica • A infecção durante a gravidez pode causar aborto, parto prematuro ou sépsis durante o período peri-parto (período desde o último mês de gravidez até cinco meses após o parto); • Os recém-nascidos infectados durante o parto podem apresentar meningite aguda após 1-4 semanas. • As bactérias atingem as meninges através da corrente sanguínea (bacteriemia). • A mãe infectada pode ser assintomática ou apresentar uma enfermidade similar à gripe. • As infecções por L. monocytogenes em adultos imunocomprometidos podem manifestar-se como sépsis ou meningite. Listeria monocytogenes • Diagnóstico laboratorial • O diagnóstico laboratorial é realizado principalmente pela coloração de Gram e por cultura. • Isolamento: pode ser isolada de amostras de sangue, LCR e trato genital, de amostras de biópsia de tecido materno/fetal e do líquido amniótico. • Cultivo: semeadura direta em meio Ágar Sangue com incubação de 18 a 24horas; Listeria monocytogenes • Diagnóstico laboratorial • Procedimentos: Cultivo em Ágar Sangue Observa-se colônias pequenas e cinzas, apresentando uma zona estreita de beta-hemólise CAMP positivo Sugestivo : L. Monocytogenes Coloração Gram A detecção de bacilos gram-positivos regulares ou cocobacilos arredondados curto, semelhantes a difteroides ou certos Streptococcus Teste da Catalase L. monocytogenes Catalase positiva Avaliação da motilidade L. monocytogenes Motilidade positiva Listeria monocytogenes • A confirmação e diferenciação é realizada por testes de fermentação de açucares. Listeria monocytogenes • Tratamento • O tratamento da doença invasiva, como meningite e sépsis, consiste em trimetoprim-sulfametoxazol. • Combinações, como ampicilina e gentamicina, ou ampicilina e trimetoprim- sulfametoxazol, também podem ser utilizadas. • Alérgicos a penicilina – trimetoprim-sulfametoxazol + rifampicina • Ciclosporinas (de primeira, segunda e terceira gerações) e as fluoroquinolonas não são ativas contra L. monocytogenes; • Devem ser tratados durante pelo menos 3 semanas, dependendo do estado imunológico; • Pacientes HIV positivos podem fazer o tratamentopermanentemente; • Linhagens resistentes são raras. • A gastrenterite ocasionada por Listeria tipicamente não requer tratamento. Listeria monocytogenes • Prevenção • A prevenção é difícil, uma vez que não há imunização. • Recomenda-se limitar a exposição de mulheres grávidas e pacientes imunossuprimidos às fontes em potencial, como animais de criação, produtos lácteos não pasteurizados, e vegetais crus. • A administração de trimetoprim-sulfametoxazol a pacientes imunocomprometidos para prevenir a pneumonia por Pneumocystis também pode prevenir a listeriose. FIM