Relatório 5

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BÁSICAS DA SAÚDE
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
DISCIPLINA CBS01020 – BIOQUÍMICA
	
		
	AULA PRÁTICA Nº 5
DETERMINAÇÃO DOS NÍVEIS DE TRIGLICERÍDEOS NO PLASMA
MARIA MANOELA REZENDE SEVERO
(00314741)
PORTO ALEGRE, 20 DE OUTUBRO DE 2020
1- INTRODUÇÃO
 Os triglicerídeos são moléculas formadas pela ligação entre um glicerol e três ácidos graxos, através de uma esterificação. Eles constituem moléculas muito hidrofóbicas e são produzidos e armazenados no organismo para fins de reserva energética.
 Mesmo sendo conhecidas como as principais gorduras do organismo humano, se estão em altos níveis no sangue aumentam as chances do indivíduo de desenvolver doenças como aterosclerose (placas de gordura nos vasos sanguíneos), pancreatite (inflamação do pâncreas), esteatose hepática (gordura no fígado), além do risco de desencadear um acidente vascular cerebral. Por isso, a determinação dos seus níveis no plasma é muito utilizada na clínica, visto que também tem grande importância no diagnóstico e controle de doenças como diabetes mellitus e distúrbios do metabolismo endócrino.
2- OBJETIVO
 O objetivo desta aula prática de número cinco é de determinar os níveis plasmáticos de triglicerídeos.
3- METODOLOGIA
3.1- Princípio da técnica
- Amostra: (plasma não hemolisado, coletado com EDTA de paciente em jejum prévio de 8-12 horas antes da coleta)
TG glicerol + ácidos graxos (reação catalizada pela lipase)
Glicerol + ATP glicerol-3-fosfato + ADP (reação catalizada pela gliceroquinase)
Glicerol-3-fosfato + O2 di-hidroxiacetona fosfato + H2O2 (mediada pela GPO)
H2O2 + 4AAP + DHBS quinoneimina + 2H2O (mediada pela peroxidase)
A quantidade de quinoneimina formada (medida entre 500-550nm) é proporcional à quantidade de triglicerídeos na amostra analisada.
 
3.2- Procedimento
- identificar 3 tubos de ensaio: B (branco); 1 e 2 (curva); A e B (amostra de paciente)
- pipetar as soluções como indicado abaixo:
	
	H2O
	Padrão
	Amostra
	Branco
	10 uL
	-
	-
	1
2 
	-
-
	5 uL
10 uL 
	-
-
	A
	-
	-
	 10 uL
	B
	-
	-
	 10 uL
Fig. 1: Tabela com os valores utilizados nas pipetagens das soluções.
- adicionar 1 mL do reagente de trabalho;
- misturar suavemente e incubar 10 min a 37C;
- Ler as absorbâncias dos tubos de padrão e amostra a 492 nm, acertando o zero com o tubo Branco;
4- RESULTADOS E DISCUSSÃO
 Após a leitura dos tubos no espectrofotômetro, os resultados obtidos estão representados na figura 2. 
	Branco
	1
	2
	A
	B
	0
	0,119
	0,241
	0,344
	0,654
	0
	0,129
	0,245
	0,336
	0,642
	0
	0,134
	0,235
	0,339
	0,640
 Fig. 2: Tabela com os valores das absorbâncias obtidas.
4.1- Cálculos das absorbâncias médias 
 Padrão 1 (0,119 + 0,129 + 0,134)/3 = 0,127
 Padrão 2 (0,241 + 0,245 + 0,235)/3 = 0,240
 Amostra A (0,344 + 0,336 + 0,339)/3 = 0,339
 Amostra B (0,654 + 0,642 + 0,640)/3 = 0,645
4.2- Cálculos das quantidades de padrão de triglicerídeos 100mg% 
Padrão 1 Padrão 2
 100mg - 100ml 100mg - 100ml
 x - 0,005ml x - 0,01ml
 x=0,005mg x=0,01mg
4.3- Cálculos dos Fatores de Calibração 
	Fator de Calibração = Quantidade/ Absorbância
 Padrão 1 FC = 0,005/0,127 = 0,03937
 Padrão 2 FC = 0,01/0,240 = 0,04166
 Fator de Calibração Médio = 0,04051
4.4- Cálculos das quantidades de triglicerídeos nas amostras de soro
	Quantidade = FCM x Absorbância
 Amostra A Quantidade = 0,04051 x 0,339 = 0,01373mg
 Amostra B Quantidade = 0,04051 x 0,645 = 0,02612mg 
4.5- Cálculos das concentrações de triglicerídeos na amostra de soro
Amostra A Amostra B
0,01373mg - 0,0001dL 0,02612mg - 0,0001dL
x - 1dL x - 1dL
 x = 137,3mg/dL x = 261,2mg/dL
 Analisando os valores obtidos e comparando-os com os valores referenciais da atualização das diretrizes brasileiras de dislipidemias e prevenção da aterosclerose de 2017, levando em consideração que o paciente em questão teve a coleta de sangue feita no estado de jejum, é possível observar alguns detalhes. 
 Como o valor de referência indica que a concentração de triglicerídeos desejável deve ser menor do que 150mg/dL, a amostra A apresenta-se dentro dos valores desejáveis e a amostra B está acima, indicando que esse paciente apresenta maiores riscos de desenvolver doenças coronarianas e ateroscleróticas.
5- CONCLUSÃO
 A partir da aula prática de número 5, foi possível determinar os níveis plasmáticos de triglicerídeos das amostras em questão. Além disso, após os cálculos necessários, foi possível concluir que, de acordo com a amostra A, os valores de triglicerídeos estão dentro do aceitável, demonstrando que tal paciente não corre risco de desenvolver complicações relacionadas aos níveis de triglicerídeos no sangue. Já a amostra B, teve seu valor de concentração de triglicerídeos maior do que o desejável, permitindo a conclusão de que tal paciente tem chances de desenvolver doenças e complicações relacionadas aos altos níveis de triglicerídeos no sangue, como doenças coronarianas e ateroscleróticas.
6- REFERÊNCIAS
Liberman & Peet - Marks Basic Medical Biochemistry 5ª Ed. 2018
https://scielo.org/