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25/10/2020 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/?user_cod=2565922&matr_integracao=202001179861 1/6 Disc.: PLATAFORMAS MOLECULARES PARA AS ATIV. BIOLÓGICAS Aluno(a): PRISCILA DURAZZO 202001179861 Acertos: 8,0 de 10,0 25/10/2020 Acerto: 0,0 / 1,0 Na técnica de extração de ácidos nucleicos (DNA/RNA), quais os reagentes que podem ser utilizados? Proteinase K Etanol 70% e isopropanol; DNAse Fenol e clorofórmio; Detergente Respondido em 25/10/2020 20:11:04 Explicação: Todos os ítens listados podem ser utilizados para viabilizar a técnica de extração de acidos nucleicos. Acerto: 1,0 / 1,0 (Fiocruz, 2010): Sobre a utilização da técnica de PCR com a finalidade de diagnóstico molecular, analise as afirmativas a seguir. I. Uma vez que na reação de PCR se utiliza uma DNA Polimerase dependente de DNA, somente os vírus cujo genoma é constituído por DNA podem ser detectados pela técnica de PCR. II. É possível detectar microorganismos diferentes em uma mesma reação de PCR, desde que se utilize na reação pares de iniciadores específicos para cada microorganismo que se queira detectar. III. A utilização da técnica de PCR para diagnóstico molecular terá sempre e somente caráter qualitativo. Assinale: se somente a afirmativa III estiver correta; se somente a afirmativa II estiver correta; se todas as afirmativas estiverem corretas. se somente as afirmativas I e II estiverem corretas; se somente a afirmativa I estiver correta; Respondido em 25/10/2020 20:12:25 Questão1 a Questão2 a https://simulado.estacio.br/alunos/inicio.asp javascript:voltar(); 25/10/2020 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/?user_cod=2565922&matr_integracao=202001179861 2/6 Explicação: É possível detectarmos patógenos cujo genoma seja RNA através de RT-PCR, ou seja, transcrição reversa acoplada à PCR. Também podemos quantificar o nosso alvo através da PCR em tempo real ou, indiretamente, mensurar aproximadamente a sua quantidade através de gel de agarose, reagente Low mass e sistema de coloração adequado para análise dos amplicons. Acerto: 1,0 / 1,0 (Polícia Científica, PE, 2016): A respeito de eletroforese, uma metodologia amplamente empregada para separação, isolamento, análise e manipulação dos ácidos nucleicos, assinale a opção correta: A identificação dos fragmentos amplificados de DNA não pode ser realizada em gel de poliacrilamida; A eletroforese em gel de agarose é usada para separar proteínas de tamanhos diferentes, que podem ser detectadas por fluorescência; A eletroforese consiste na migração das partículas de uma solução coloidal sob a influência de um campo magnético onde a polaridade negativa atrai as moléculas; Os ácidos nucleicos possuem uma carga geral total positiva, devido aos seus grupamentos fosfato do arcabouço e, consequentemente, quando aplicados em um gel de agarose ou poliacrilamida, migram em direção ao ânodo. A quantificação de DNA em gel de agarose é uma técnica de menor precisão, comparada a eletroforese em acrilamida, sendo utilizada como instrumento para averiguação de êxito na etapa de extração; Respondido em 25/10/2020 20:25:30 Explicação: A eletroforese em gel de agarose destina-se apenas a ácidos nucleicos, enquanto a eletroforese em gel de poliacrilamida pode ser empregada para ácidos nucleicos e proteínas. Na técnica de eletroforese, graças à aplicação de campo elétrico, as partículas são induzidas a migrar no polímero. O movimento das partículas é determinado em função da repulsão do pólo negativo uma vez que, em função dos seus respectivos grupamentos fosfato, o DNA possui cargas semelhante. Acerto: 1,0 / 1,0 (INCA, 2014): Qual afirmação descreve com precisão o processo de PCR? A reação de PCR requer um tipo especial de enzima de restrição; O peso molecular do fragmento de DNA não é diagnóstico de especificidade de um PCR; Os produtos de PCR são inibidores da reação em cadeia da polimerase; É necessário um par de primers para a amplificação de um fragmento de DNA; A reação de PCR amplifica geometricamente um fragmento de DNA. Respondido em 25/10/2020 20:26:03 Explicação: Os produtos de uma etapa da reação de PCR servem como substrato para as etapas subsequentes. Não é necessário utilizar enzima de restrição para essa metodologia. O uso de pesos moleculares auxilia na deteção de amplificações inespecíficas. A amplificação é considerada exponencial. Acerto: 0,0 / 1,0 (Unesp, 2012): Um clone de cDNA para um gene humano que codifica uma proteína amilase foi marcado com radioatividade e utilizado em um experimento de Southern blotting. Nesse experimento, o DNA genômico de Ratos Wistar foi digerido com a enzima de restrição Eco RI e três fragmentos de DNA foram observados na análise de Southern blotting. Quando os pesquisadores realizaram os mesmos experimentos com outra Questão3 a Questão4 a Questão5 a 25/10/2020 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/?user_cod=2565922&matr_integracao=202001179861 3/6 linhagem de ratos, foi observada a ausência de fragmentos na análise de Western blotting, mesmo após estes experimentos terem sido repetidos três vezes. Podemos concluir corretamente que: esses resultados mostram que existem três sítios de restrição para a enzima Eco RI no DNA genômico dos ratos Wistar, gerando, portanto, três fragmentos de tamanhos diferentes na análise de Southern blotting. Na outra linhagem de ratos, a presença de apenas um sítio de restrição para essa enzima (Eco RI) gera um fragmento muito grande, o qual não é capaz de se hibridizar com o clone de cDNA e, portanto, não é possível ser detectado pela análise de Southern blotting; esses resultados demonstram que o DNA dos ratos Wistar contém dois ou mais sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos de tamanhos diferentes. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos fornece prova de que esses animais sofreram mutações na sequência de DNA que codifica a proteína amilase e essa sequência não é mais reconhecida pela enzima de restrição Eco RI, portanto não são observados fragmentos na análise de Southern blotting; esses resultados demonstram que, na linhagem de ratos Wistar, existe um sítio de restrição para a enzima Eco RI na sequência da proteína amilase e, portanto, são observados três fragmentos com tamanhos diferentes que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos demonstra a falta de sítios de restrição para a enzima Eco RI na proteína amilase desses animais, indicando, portanto, que o gene da amilase está deletado por mutação no DNA desses animais. na linhagem de ratos Wistar a região do DNA que codifica a proteína amilase contém dois sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos sugere que esses animais não têm a capacidade de produzir essa enzima amilase, pois essa sequência de DNA pode ter sido perdida ou deletada; os resultados da análise de Southern blotting com os ratos Wistar demonstram que há o reconhecimento de sítios de restrição pela enzima Eco RI na sequência de DNA do gene que codifica a proteína amilase. Entretanto, a ausência de fragmentos na outra linhagem de camundongo analisada é certamente resultado de erros metodológicos na aplicação dessas análises, pois este seria um resultado improvável; Respondido em 25/10/2020 20:32:22 Explicação: O número de sítios de restrição cliváveis pela enzima Eco RI para o gene analisado irá implicar na quantidade de fragmentos encontrados. Um sítio de restrição gera dois fragmentos, dois sítios de restrição gera três fragmentos e, assim sucessivamente. Na outra linhagem de ratos, a ausência de bandas no Western Blot sinaliza a ausência da proteína (amilase) que seria codificada pelo seu respectivo genecodificante. Acerto: 1,0 / 1,0 (UnB, Cespe): Em um experimento de proteômica, ao se analisar géis de eletroforese bidimensional provenientes de amostras de eritrócitos humanos, comparando-se duas situações diferentes (exposto versus não exposto a um medicamento), foram analisadas amostras de 3 indivíduos em cada condição, sendo cada amostra analisada em triplicata, em um total de 18 géis. Para que seja possível determinar quais proteínas devem ser identificadas como presentes em quantidades distintas nas duas condições, é necessário realizar determinadas etapas. Assinale opção que apresenta a ordem correta de realização dessas etapas: detecção, para delimitação das áreas dos spots; pareamento dos spots em cada grupo e, a seguir, entre os grupos; análise estatística comparando as intensidades dos spots; análise estatística comparando massa molecular e pI dos spots; detecção, para delimitação das coordenadas cartesianas de cada spot; pareamento entre os spots de cada grupo; pareamento, para delimitação das coordenadas e da intensidade de cada spot; detecção, para a comparação entre os grupos; análise estatística para validação dos dados de detecção; detecção, para determinação das coordenadas cartesianas dos spots; análise estatística da variação de massa molecular de cada spot; pareamento com base nas intensidades de cada spot. pareamento dos spots entre todos os grupos; análise estatística comparando as coordenadas cartesianas dos spots; detecção, para delimitação das áreas dos spots; Respondido em 25/10/2020 20:54:13 Explicação: Existem softwares que comparam os géis bidimensionais permitindo a contagem do número de spots, a caracterização automática dos valores de pI e massa molecular, análise de níveis de expressão e etc, validando os dados estatisticamente ao final. Questão6 a 25/10/2020 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/?user_cod=2565922&matr_integracao=202001179861 4/6 Acerto: 1,0 / 1,0 (Adaptada de CESPE, 2018): Complete as lacunas do texto a seguir, a respeito do projeto genoma (humano e outros) e às estratégias de sequenciamento disponíveis: "As técnicas de sequenciamento genômico se baseiam na _______________ da dupla fita de _______________ em moléculas de fita simples." Transcrição/ DNA; Tradução/ DNA; Transcrição/RNA; Nenhuma das alternativas acima. Tradução/RNA; Respondido em 25/10/2020 20:45:07 Explicação: As técnicas de sequenciamento visam elucidar a ordem das bases nitrogenadas que compõem as moléculas de DNA. Acerto: 1,0 / 1,0 (UFAM, 2016): Quando comparada com a clonagem molecular em células hospedeiras, a PCR possui muitas vantagens. Sob essa perspectiva, qual das alternativas a seguir é incorreta? Por ser um processo automatizado, a PCR é mais simples de ser conduzida; A PCR é uma técnica muito versátil e, atualmente, proporciona a amplificação de até 20 Kb de DNA. Na clonagem, utilizando-se vetores plasmidiais, pode haver limitações quanto ao tamanho do inserto a ser clonado; A PCR pode ser utilizada para amplificar DNA de material degradado, muito útil em investigações forenses. A PCR gera fragmentos de DNA bem maiores que na clonagem molecular, além de possuir uma fidelidade mais alta no processo; Velocidade do procedimento: a PCR pode durar algumas horas, enquanto o procedimento de clonagem molecular é realizado em um ou mais dias; Respondido em 25/10/2020 20:51:27 Explicação: Um produto de PCR, após amplificação, pode ser clonado em vetor. O parâmetro "tamanho do inserto" pode ser ajustado de acordo com os diferentes vetores de clonagem possíveis, adequados para menores ou maiores extensões. O ensaio da PCR não está livre de incorporação de erros, uma vez que a enzima está submetida a vários ciclos de oscilação de temperatura em um curto espaço de tempo. Acerto: 1,0 / 1,0 (FMTM, MG): Dois homens, P-I e P-II, disputam a paternidade de uma criança C, filha da mulher M. Diante disso, foi pedido o exame de DNA dos envolvidos. O resultado do teste revelou os seguintes padrões: Questão7 a Questão8 a Questão9 a 25/10/2020 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/?user_cod=2565922&matr_integracao=202001179861 5/6 Acerca dos resultados obtidos foram feitas as seguintes afirmações: I. P-II pode ser o pai da criança, pois há maior quantidade de faixas coincidentes com o padrão da criança; II. as faixas de números 3, 9, 10, 14, e 17 correspondem ao DNA que a criança recebeu da mãe; III. não é possível excluir a possibilidade de P-I ser o pai da criança. Está correto o contido apenas em: II; I; I e II; I e III; II e III. Respondido em 25/10/2020 20:49:14 Explicação: É possível excluir a paternidade de P-I à medida em que, após excluir as bandas que têm correspondência com a mãe, P-I e a criança não possuem bandas compatíveis. Acerto: 1,0 / 1,0 (UNIFESP, 2017): Por que a alteração na sequência de DNA provocada pelo CRISPR-Cas9 pode inativar um gene? Questão10 a 25/10/2020 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/?user_cod=2565922&matr_integracao=202001179861 6/6 Porque o RNA transcrito não será traduzido; Porque o RNA transcrito tem uma meia vida menor do que o RNA original; Porque o RNA transcrito a partir dessa sequência também será alterado; CRISPR-Cas9 é incapaz de inativar um gene. Porque o DNA alterado não será transcrito; Respondido em 25/10/2020 20:47:35 Explicação: De acordo com o dogma da biologia molecular, a alteração na sequência de DNA implicará na alteração do RNA transcrito. Consequentemente, a proteína traduzida a partir desse RNAm pode não ser funcional, ou seja, o gene pode ser inativado. javascript:abre_colabore('38403','211196088','4247932961');