Microscopias e Métodos de Estudo

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MICROSCOPIAS 
Disciplina: Citologia e Embriologia 
Professora: Luciana Tavares 
O MICROSCÓPIO ÓPTICO 
 
 Primeira geração de microscópios -
Galileu Galilei (1564-1642), Hans e 
Zaccharias Janssen (1590) 
 
 Robert Hooke (1663 -1665); Antoni van 
Leeuwenhoek (1673) 
Diferentes modelos de microscópios ópticos. 
van Leeuwenhoek Microscope 
Circa late 1600 
Microscópio óptico 
Parte Mecânica 
 
 Parte Óptica 
 
 Poder de resolução 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Capacidade que tem os 
instrumentos ópticos de 
formarem imagens distintas de 
pontos situados próximos uns 
dos outros. 
O limite de resolução da 
Microscopia Óptica é de 0,2 μm. 
 
Cortes histológicos de diferentes tecidos animais: A - Pâncreas (100x); B - Pele (400X); C 
- Traquéia (400X) e D - Pele (1000X). 
C 
B A 
D 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
 Em 1931, iniciados estudos para 
construção do microscópio eletrônico. 
 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE 
TRANSMISSÃO 
 
 Alta resolução 
 
Cortes muito finos (0,02 a 0,1 μm) 
 
 
Microscópio eletrônico de Transmissão. 
Desenho esquemático de um microscópio 
eletrônico de transmissão. (Junqueira e 
Carneiro, 2004) 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE 
VARREDURA 
 
 Alta resolução 
 
 Fragmentos maiores ou tecidos 
inteiros 
 
 
 
 
 
 
Eletromicrografias 
Eletromicrografias de diferentes amostras biológicas. 
Microscópio eletrônico de 
Varredura. 
Desenho esquemático de um 
microscópio eletrônico de 
varredura. (Junqueira e 
Carneiro, 2004) 
Eletromicrografias de diferentes amostras 
biológicas. 
Eletromicrografias 
 
MÉTODOS DE ESTUDO 
DAS CÉLULAS E 
TECIDOS 
 
Disciplina: Citologia e Embriologia 
Professora: Luciana Tavares 
PREPARAÇÃO DE MATERIAL PARA 
ANÁLISE AO MICROSCÓPIO 
 
 
 Células e tecidos preservados 
 
 Coleta do material biológico – 
Espalhamento; Estiraço; Montagem total e 
Corte histológico 
 
 Obtenção de um preparado permanente 
 
 
 
 
Coleta do material biológico 
 
 Espalhamento 
 
Espalhamento de células da mucosa 
vaginal. (Carvalho e Recco-Pimentel, 
2007) 
Estiraço (esfregaço) 
Estiraço sanguíneo. 
 Montagem total 
 
 
Corte Histológico 
Montagem total de 
Elodea. 
 
Corte histológico de duodeno. 
 
Principais etapas do processamento de material biológico para inclusão e cortes em parafina.
 
 
 
Principais etapas do 
processamento de material 
biológico para inclusão e cortes em 
parafina (Carvalho e Recco-Pimentel, 2007) 
 
Etapa do 
processamento 
Agente Tempo médio 
Fixação Formol 24 horas 
(dependendo do 
material) 
Lavagem Água corrente Dobro do tempo 
da fixação 
Desidratação Série crescente de álccol etílico 50%, 70%, 
80%, 90%, 95% e 100% 
60 minutos em 
cada banho 
Diafanização Xilol, benzol, toluol (três banhos) 60 minutos 
Impregnação pela 
parafina 
Parafina líquida (vários banhos) 3 horas 
Emblocamento Parafina pura Alguns minutos 
Microtomia Micrótomo indiferente 
Desparafinização 
Hidratação dos cortes 
Xilol (três banhos). 
Série decrescente de álcool etílico 100% (dois 
banhos), 95%, 90%,80%, 70% e 50% e água 
corrente. 
5 minutos 
2 minutos em 
cada banho 
5 minutos 
Coloração Corantes específicos- Hematoxilina e Eosina 45 segundos a 2 
minutos 
2 minutos 
Desidratação 
Diafanização 
Montagem final 
Série crescente de álcool etílico 50%, 70%, 
80%, 90%, 95% e 100%. 
Xilol. 
Bálsamo do Canadá ou resinas sintéticas. 
Alguns minutos 
Esquema mostrando os 
aspectos diferentes dos 
cortes através de um 
tubo enovelado, em 
níveis diferentes. 
(Junqueira e Carneiro, 
2009) 
CITOQUÍMICA 
 
 
 Ácidos nucléicos, polissacarídeos, 
lipídios, proteínas, enzimas, alguns íons 
(Ca2+ no tecido ósseo) 
 
 Produto da reação deve ser corado 
Agente 
cromogênico 
 
Grupamento 
químico 
 Reativo 
Schiff 
Aldeídos 
livres 
Reação de Feulgen 
 
Ácido Desoxirribonucléico (DNA) 
a. Fotomicrografia de corte 
de testículo evidenciando 
fases da maturação 
espermática. b. Epitélio da 
próstata. (Carvalho, H.F.; 
Recco-Pimentel, S.M., 
2007) 
 
Reação de Feulgen. 
Reação do PAS (Periodic Acid Schiff) 
 
Polissacarídeos - Glicogênio, amido, celulose, 
glicoproteínas, ácido hialurônico, proteoglicanas. 
 
Fotomicrografia de corte 
de fígado tratado pela 
reação do PAS, 
evidenciando o glicogênio 
(seta). 
Reação do PAS 
IMUNOCITOQUÍMICA 
 
 Localização de proteínas 
específicas 
 
Técnica de imunocitoquímica direta. Junqueira e Carneiro, 2012. 
RADIOAUTOGRAFIA 
 
 Locais de síntese e destino de 
moléculas 
 
 Sensibilidade das emulsões 
fotográficas às radiações ionizantes 
 
 
Fases da técnica de 
radioautografia. Exemplo, 
estudo da síntese de DNA pela 
injeção de timidina radioativa. 
Junqueira e Carneiro, 2012 
FRACIONAMENTO CELULAR 
 
 Conjunto de procedimentos que levam a 
separação das organelas celulares (Carvalho e 
Recco-Pimentel, 2007). 
Esquema da técnica 
de fracionamento 
celular. Junqueira e 
Carneiro, 2012 
Cultura de células. (Cooper, G.M., 
2001) 
CULTURA DE CÉLULAS