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Centro Universitário Estácio de Belo Horizonte Unidade Floresta Fundamentos de Microbiologia e Imunologia RELATÓRIO Aula Prática no. 4 - Coloração de Gram 3° Período/ Turma: 323/Enfermagem Matutino BELO HORIZONTE, ABRIL DE 2019 SUMÁRIO 1 – INTRODUÇÃO ..................................................................................... 3 2 – OBJETIVOS .......................................................................................... 4 3 – MATERIAIS UTILIZADOS ..................................................................5 4 – RESULTADOS E DIRCUSSÃO .......................................................... 6 5 – CONCLUSÃO ....................................................................................... 8 6 – BIBLIOGRAFIA ................................................................................... 9 1 – INTRODUÇÃO Coloração De Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de microrganismos através das cores, para serem observados em microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram” (Martinez, 2015). O surgimento da coloração representa um dos mais importantes pontos de partida aos avanços da microbiologia clínica e em outros campos da microscopia diagnóstico dos últimos 100 anos. A coloração de Gram é um método utilizado com a finalidade de classificar os microrganismos com base em suas características tintoriais, tamanho, forma e arranjo celular. E Ao transtornos da classificação das bactérias podem ser Gram-positivas e Gram-negativas, quanto aos aspectos tintoriais, coram se respectivamente de roxo e rosa (Freitas et al., 2007). 2 – OBJETIVOS Realizar a coloração de Gram a fim de diferenciar bactérias Gram-positivas de bactérias Gram-negativas. 3 – MATERIAIS UTILIZADOS Solução de cristal violeta Lugol Álcool a 95% Estantes para tubo de ensaio Caixa de laminas para microscopia Suporte por pia para coloração de laminas Alças de platina Bicos de Bunsen 1 caixa de fosforo Microscópio Óleo de Imersão Placas com cultura de bactérias 4 – RESULTADOS E DISCUSSÃO No laboratório de microbiologia realizou-se o procedimento de preparação. De lâminas com microrganismo para fazer-se a coloração de Gram. Utilizou-se para isso uma cultura. Procedeu-se inicialmente com o preparo e fixação do esfregaço na mesa de preparo onde através de um palito de fósforo acendeu-se o bico de Bunsen e fez-se a esterilização do tipo calor seco da alça bacteriológica inserindo-a na chama de fogo até chegar ao ponto em que observou-se a cor alaranjada da alça, logo em seguida colocou-se na placa de cultura de bactérias ,pingou-se 1 gota de solução salina na lâmina e fez-se o esfregaço espalhando as bactérias na lâmina fosca e imediatamente, a fixação passando a lâmina sobre a chama do bico de Bunsen. Depois levou-se para pia onde foi feito o esfregaço, através dos produtos de coloração e com os tempos determinados fez-se o procedimento seguinte: cobriu-se o esfregaço com o corante solução de cristal violeta por cerca de 60 segundos, Em seguida, lavou-se em água corrente da torneira; em seguida cobriu-se o esfregaço com solução de Lugol por 60 segundos, depois lavou-se com álcool absoluto até sair todo corante ,por fim colocou-se a lâmina na pia para secar .Por último foi a colocação de óleo de imersão na lâmina para então inserir no microscópio e fazer a observação na objetiva de imersão (objetiva de 100x). Perguntas: . Descreva a estrutura e composição da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. R: As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa. Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final. - Explique o fundamento da técnica da coloração de Gram. Qual a etapa crucial na execução da coloração de Gram. R: A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias. Esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura. A última etapa é a crucial, pois vai definir se é Gram-positiva ou Gram-negativa. - Desenhe e descreva cada tipo de bactéria visualizada na aula prática. Visualiza-se a bactéria Bacillus sp. G (-). 5 – CONCLUSÕES Observou-se presença de números Estafilococos (Staphylococcus), Gram-negativos aos em cachos numerosos. 6 – BIBLIOGRAFIA As informações contidas neste relatório foram extraídas da apostila de aulas práticas – Fundamentos de Microbiologia e Imunologia (SDE3898).