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A Aplicação Industrial da Microbiologia BIOTECNOLOGIA A Microbiologia Industrial é a parte da Microbiologia que se dedica à produção de bens e serviços por microrganismos. A diversidade de áreas de aplicação da Microbiologia Industrial, como a indústria farmacêutica, alimentar, agropecuária, energética, têxtil e de tratamento de resíduos, justifica a importância e o impacto deste tema na atualidade. A biotecnologia é a aplicação da tecnologia em sistemas vivos. A aplicação industrial dos microrganismos é um aspecto da biotecnologia. Introdução Microrganismos como elementos-chave em processos biotecnológicos • Microbiologia industrial = otimização de certas reações para produção de compostos de interesse. • Biotecnologia = microrganismos geneticamente modificados visando a produção de produtos que normalmente eles não são capazes de produzir. Introdução Biotecnologia é apenas transformação genética Microbiologia Industrial Principais organismos • Fungos = leveduras e bolores • Actinomycetes = Streptomyces Características dos microrganismos empregados em processos biotecnológicos: • Crescer in vitro • Crescer em larga escala • Não ser fastidioso • Crescer mesmo em condições subótimas • Ser de fácil manutenção • Não ser patogênico • Ser facilmente manipulável e geneticamente estável Microbiologia Industrial Processos • Produção de fármacos: antibióticos, esteróides, insulina. Novos produtos como a insulina e o interferon estão sendo produzidos por bactérias geneticamente construídas. • Produção de químicos valiosos: solventes e enzimas, bem como vários compostos utilizados como matéria- prima para a síntese industrial de outras substâncias. • Produção de suplementos alimentares: probióticos, etc. • Produção de bebidas alcoólicas: cerveja, vinho, destilados, etc. Constituem alguns dos processos mais antigos da biotecnologia de larga escala. Microbiologia Industrial • Produção de vacinas (agentes imunizantes, principalmente antivirais). As células microbianas íntegras, suas partes ou seus produtos são obtidos em grande quantidade e utilizados para a produção de vacinas. • Controle biológico de pragas e doenças: B. thuringiensis, Beauveria, etc. Produção de microrganismos para ser utilizados como inseticidas (biocidas). Estes microrganismos produzem uma proteína cristalizada que é letal para larvas de lepidópteros. • Uso de microrganismos na mineração e na indústria do petróleo. • Biorremediação/fertilidade dos solos: micorrizas, culturas “feitas sob medida”, etc. Processos podem ser melhorados engenharia genética grande potencial com grande impacto econômico Microrganismos na produção de alimentos Fermentação de produtos lácteos • Iogurte – Lactococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus • Kefir (leite fementado) – Lactococcus lactis, L. bulgaricus e leveduras • Leite fermentado – Lactobacillus acidophilus • Manteiga – Streptococcus cremoris, Leuconostoc cremoris e Lactobacillus lactis Microrganismos na produção de alimentos Fermentação de produtos lácteos o Queijo • Lactococcus e Lactobacillus • Propionibacterium – queijo Suíço • Penicillium – queijo camembert, roquefort, brie Microrganismos na produção de alimentos Vegetais fermentados • Chucrute – Enterobacter cloacae, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus plantarum, L. brevis • Picles – L. plantarum, L. mesentereoides, Enterococcus faecalis, Pediococcus cerevisae, Pseudomonas spp., Flavobacterium spp., Bacillus spp. e leveduras Microrganismos na produção de alimentos Vegetais fermentados • Azeitonas – Leuconostoc • Molho de soja – Aspergillus oryzae, Pediococcus soyae, Saccharomyces spp., Torulopsis spp., e Lactobacillus spp. • Miso – Aspergillus oryzae Microrganismos na produção de alimentos Fermentação de carnes • Embutidos – produzidos por bactérias do ácido lático, em particular Pediococcus cerevisae. Produção de pães • Pães – Saccharomyces cerevisae, Clostridium spp. e bactérias coliformes podem ser empregados Microrganismos na produção de alimentos Bebidas alcoólicas • Etanol (álcool etílico): • é um solvente comum; • é matéria-prima utilizada no laboratório e na indústria química; • produzido por leveduras que utilizam qualquer carboidrato fermentável como substrato. • Carboidratos utilizados: malte da cevada, pasta de cereais, mostro da uva, melaço, pasta de malte de milho e centeio, etc. Microrganismos na produção de alimentos Bebidas alcoólicas • Cervejas: produção de 50 bilhões de litros por ano usando Saccharomyces cerevisae. • Malte da cevada e amido misturados com água morna. • Após a conversão enzimática do amido, o mostro é filtrado e fervido com o lúpulo. • Finalmente é fermentado com a levedura. Microrganismos na produção de alimentos Bebidas alcoólicas • Vinho: fermentação usando S. cerevisae e S. ellipsoideus (várias amostras). • Mostro de uva com concentração de açúcar superior a 22%. • A massa é sulfitada para reduzir a taxa de fermentação. • Pode ser fermentada com uma amostra especial de levedura ou com leveduras presentes na uva. • A fermentação primária é sucedida por um período de armazenamento para o envelhecimento. Microrganismos na produção de alimentos Bebidas alcoólicas • Uísque escocês: fermentação usando S. cerevisae (geralmente uma levedura especial). • Pasta de cereal cozida, sacarificada com turfa de malte e fermentada. • Destilado e envelhecido em barril de carvalho por pelo menos três anos. • Misturado a seguir com cereal de uísque. Microrganismos na produção de alimentos Bebidas alcoólicas • Cachaça: fermentação usando S. cerevisae ou outras leveduras. • Destilado feito à base de cana-de-açúcar, leveduras e água. • Entram na composição da cachaça mais de 300 substâncias, das quais noventa e oito por cento (98%) consistem de água e etanol. • As substâncias contidas no mosto, extraídas do colmo da cana, sofrem reações entre sí e em decorrência dos processos de fermentação, destilação e envelhecimento. Microrganismos na produção de alimentos Bebidas alcoólicas • Vinagre • Vinagre = “vinho ácido”. • fermentação a álcool (S. cerevisae) e em seguida a ácido acético (Acetobacter e Gluconobacter) ou conversão direta a acetato (Clostridium spp.) Produtos ligados à saúde • Antibióticos - Agentes antimicrobianos produzidos por microrganismos (bactérias e fungos) exibindo função de inibir ou eliminar outros microrganismos • 1941 – nenhuma indústria de antibióticos • Ganhadores do Premio Nobel em Fisiologia e Medicina de 1945 “Descoberta da Penicilina e seus efeitos curativos em várias doenças infeciosas“ → Sir Alexander Fleming, Ernst B. Chain e Sir Howard Florey. • 1951 – 344 milhões de U$D por ano • 1980 – 100.000 toneladas com vendas superiores a 1 bilhão de U$D/ano somente nos EUA • 2010 – 20 bilhões de U$D/ano • Custo de produção de um antibiótico: 1,2 bilhões de U$D e cerca de 15 anos até a comercialização Produtos ligados à saúde • Antibióticos - Agentes antimicrobianos produzidos por microrganismos (bactérias e fungos) exibindo função de inibir ou eliminar outros microrganismos • 1941 – nenhuma indústria de antibióticos • Ganhadores do Premio Nobel em Fisiologia e Medicina de 1945 “Descoberta da Penicilina e seus efeitos curativos em várias doenças infeciosas“ → Sir Alexander Fleming, Ernst B. Chain e Sir Howard Florey. • 1951 – 344 milhões de U$D por ano • 1980 – 100.000 toneladas com vendas superiores a 1 bilhão de U$D/ano somente nos EUA • 2010 – 20 bilhões de U$D/ano • Custo de produção de um antibiótico: 1,2bilhões de U$D e cerca de 15 anos até a comercialização Antibiótico Microrganismo Produtor Cloranfenicol Síntese química: anteriormente produzido via síntese microbiana por S. venezuelae (A) Cicloheximida Streptomyces griseus (A) Cicloserina Streptomyces orchidaceus (A) Eritromicina Streptomyces erithreus (A) Cefalosporina Cephalosporium sp. (F) Kanamicina Streptomyces kanamyceticus (A) Griseofulvina Penicillium griseofulvin (F) Bacitracina Bacillus licheniformis (BFE) Neomicina Streptomyces fradiae (A) Nistatina Streptomyces noursei (A) Penicilina Penicillium chrysogenum (F) Polimyxina B Bacillus polimyxa (BFE) Estreptomicina Streptomyces griseus (A) Tetraciclina Streptomyces rimosus (A) Alguns antibióticos produzidos comercialmente Isolamento e seleção de microrganismos produtores de antibióticos (Ex. : Estreptomicina) Produtos ligados à saúde Enzimas o Catalisadores: aceleram atividades bioquímicas o Utilizadas como suplementos nutricionais o Produzidas por fungos e bactérias como: Aspergillus, Penicillium, Mucor e Rhizopus. o Exemplos: • Amilases: preparo de adesivos e colas, clareamento de sucos de frutas, produção de detergentes. • Invertases: catalisa a hidrólise do dissacarídeo sacarose aos monossacarídeos glicose e frutose – preparo de doces recheados com creme, produção de xaropes que não cristalizam (refrigerantes). Produtos ligados à saúde o Exemplos: • Proteases: curtimento do couro; tratamento da seda e componente de detergentes. • Pectinases: sucos – utilizada no clareamento de sucos de frutas e na maceração da fibra do linho para a produção do tecido. • Estreptoquinase – tratamento de pacientes que sofreram ataques cardíacos. • Celulase – digestivo. • Glicose oxidase – remove glicose dos ovos antes do ressecamento; remove o oxigênio de alimentos enlatados, refrigerantes e cervejas; utilizada na produção de fitas-teste para o controle de diabetes. Produtos ligados à saúde • Aminoácidos e vitaminas - largo espectro de uso comercial como aditivos ou suplementos alimentares e agentes terapêuticos. • Grande importância dos aminoácidos - alimentação humana e no enriquecimento de ração animal. • Grande número de aminoácidos não é sintetizado no organismo de animais superiores. • Esses aminoácidos devem ser introduzidos na dieta através da alimentação. • Organismo humano - incapaz de sintetizar metade dos 20 aminoácidos essenciais. • Cerca de 70% da produção industrial de aminoácidos é utilizada na formulação de alimentos. • 30% restantes utilizados como aditivos de rações. • Vitaminas são indispensáveis ao metabolismo de animais superiores. • Encontradas em diversos alimentos, porém em quantidades pequenas. • In: SILVA, D.D.V., CARVALHO W., CANILHA L.; MANCILHA I. M., 2005). Produtos ligados à saúde Vitaminas o A maioria é produzida quimicamente, mas muitas são muito complexas e portanto produzidas apenas por microrganismos. o Principais: →B12: • Sintetizada exclusivamente por microrganismos. • Essencial a todos os animais. • Suplemento alimentar animal e de outros alimentos. • Essencial no sangue (hemácias). • Tratamento da anemia perniciosa. • Não é produzida por plantas (vegetarianos). • Microrganismos produtores: Propionibacterium e Pseudomonas. →Riboflavina: bactérias e fungos (Eremothecium ashbyl) – suplemento vitamínico Vitamina B12 Riboflavina Produtos ligados à saúde Aminoácidos • Alguns aminoácidos como glutamato, lisina, fenilalanina, aspartato, treonina e isoleucina são atualmente obtidos por via fermentativa. • Fermentações empregam diferentes fontes de carbono, como glicose, frutose, melaço, hidrolisados de amido, etanol, glicerol, acetato, propionato, etc • Dentre os microrganismos empregados na • produção de aminoácidos, têm sido mencionados como bons produtores a Escherichia coli e espécies dos gêneros Brevibacterium e Corynebacterium. Produtos ligados à saúde Aminoácidos • Ácido glutâmico: glutamato monossódico – condimento e intensificador de sabor, produzido por Corynebacterium glutamicum. • Ácido aspártico Aspartame • Fenilalanina • Lisina: aditivo alimentar produzido por Brevibacterium flavum. In: www.unica.com.br Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock Produtos ligados à saúde Esteróides e outras biotransformações o Hormônios animais. o Utilizados como fármacos: • Corticosteróides: reduzem inflamações, artrites, etc. • Estrógenos e androgênicos: usados na fertilidade humana e ganho de massa muscular. • Cortisona e hidrocortisona: usados no controle de pruridos subcutâneos. o Podem ser produzidos quimicamente, mas normalmente, pela dificuldade de síntese, tem pelo menos uma etapa microbiana = biotransformação. o Produção anual supera 800 toneladas. Aplicação na mineração e na indústria do petróleo - biomineração Redução das reservas mundiais Exploração de minérios de baixa qualidade Poluição causada pelos métodos tradicionais de extração • Uso de microrganismos mineradores – vários processos microbiológicos são utilizados para aumentar a recuperação de metais de minérios de baixa qualidade e melhorar a recuperação de óleo a partir de mananciais. • Thiobacillus thioxidans e Thiobacillus ferroxidans • ácidos oxidação do minério precipitação A companhia Vale tem um projeto em biomineração Biomineração Biomineração Biomineração do cobre • Microrganismos mineradores consomem substâncias conhecidas como sulfetos, e os convertem em ácido sulfúrico, que acaba tornando solúveis os minérios de interesse econômico. • Microrganismos são recuperados posteriormente, na forma sólida, para remover poluentes tóxicos do ambiente (principalmente do solo e da água). • Cerca de 20% do cobre produzido no mundo já é extraído por biomineração, e boa parte dele vem do Chile, onde o processo está mais desenvolvido. Bactéria extremófila A. ferrooxidans em plena atividade de biomineração. [Imagem: Unesp Ciência] Biomineração Resíduos e rejeitos • Espera-se que a biomineração aumente a eficiência do processo extrativo. • Microrganismos podem ser usados em materiais com baixo teor do metal de interesse, quando o custo de empregar as tecnologias atuais não compensa. • Isso significa explorar depósitos que hoje são considerados economicamente inviáveis. • Usar a mão de obra invisível também é conveniente quando o substrato é complexo, porque aglutina diferentes tipos de minerais, o que hoje representa um desafio para a mineração tradicional. Biomineração • As bactérias conseguem retirar metais de resíduos e dejetos da indústria mineradora, fazendo ao mesmo tempo a extração do material de interesse econômico e o tratamento dos efluentes. • O grupo de pesquisa chefiado por Denise em Araraquara trabalha com a calcopirita (CuFeS2), o minério bruto de onde é extraído o cobre. • Bactéria: Acidithiobacillus ferroxidans. • In: http://www.inovacaotecnologica.com.br/noticias/noticia.php?artigo= biomineracao-bacterias-fungos#.VV4zeJUtDIU Biorremediação Tecnologia que utiliza agentes biológicos, particularmente microrganismos, para remover poluentes tóxicos do ambiente (principalmente do solo e da água). Poluentes são decompostos em substâncias atóxicas por meio do metabolismo microbiano. Tanto microrganismos do ambiente quanto culturas “feitas sob medida” (algumas com espécies geneticamente construídas) são utilizadas em biorremediação. Biorremediação Exemplo: • Derramamento de óleodo navio Valdez, no Alasca • Para a remoção do óleo bruto, foram aplicados fertilizantes de microrganismos a 79 milhas do litoral para promover o crescimento e a atividade metabólicas de bactérias degradadoras de hidrocarbonetos já presentes. • Em outros casos, os microrganismos estão sendo geneticamente construídos para decompor poluentes tóxicos específicos. Biorremediação Biorremediação - técnica que consiste na aplicação de processos biodegradáveis no tratamento de resíduos para recuperar e regenerar ambientes (principalmente água e solo) que sofreram impactos negativos, mantendo o equilíbrio biológico em ecossistemas. Técnicas mais utilizadas da biorremediação aplicação de microrganismos selecionados bioaumentação, que aceleram o processo de degradação da matéria orgânica, para incrementar a população microbiana no sistema de tratamento, recuperando e/ou aumentando a eficiência do processo biológico. Biorremediação Os microrganismos, agentes da biorremediação, estão presentes em todos os lugares e em populações variáveis. Porém a interferência humana no meio ambiente, particularmente a acumulação de grandes quantidades de resíduos orgânicos e de elementos tóxicos, afeta o equilíbrio ecológico de duas formas: Biorremediação de Solos com Poluição Química Bioaumentação em Processo de “Landfarming” de resíduos orgânicos Biorremediação de Solos com Poluição Química Simbioses Radiculares em Ambientes Contaminados Microrganismos na Recuperação de Áreas Degradadas Microrganismos no Controle Biológico - Bioinseticidas Bioinseticas – inseticidas químicos sintetizados pelos microrganismos ou são microrganismos que infectam e matam os insetos. Várias bactérias, fungos e vírus causam doenças que erradicam populações de insetos. Estes microrganismos – entomopatógenos - tem várias vantagens: • são patogênicos para insetos e inofensivos às plantas e outros animais; • o perigo em potencial de resíduos químicos no ambiente é eliminado; • inseticidas microbianos continuam a ser melhorados pela engenharia genética. Microrganismos no Controle Biológico Trichoderma stromaticum (controle Vassoura de Bruxa) (Brasil) Microrganismos no Controle Biológico Fungos no Controle Biológico • Fungos entomopatogênicos têm como hospedeiros primários os afídeos, moscas-brancas, gafanhotos, moscas, besouros, lagartas, tripes e ácaros. • Têm a capacidade de infectar todos os estádios de desenvolvimento dos hospedeiros. • Fungos invadem os insetos por diversas vias, mas principalmente através da cutícula ou pele (tegumento). • Multiplicam-se por todo o corpo do hospedeiro. • Morte causada pela destruição dos tecidos e pelas toxinas produzidas pelos fungos. Fungos no Controle Biológico • Fungos entomopatogênicos emergem dos insetos mortos, produzem esporos que se espalham. • No Brasil são conhecidas formulações de Metarhizium anisopliae para controle de cigarrinhas das pastagens e cana-de-acúcar e Beauveria bassiana para manejo de broca do café, moleque da bananeira, ácaros etc. • Fungos de ocorrência natural como Nomuraea rileyi, no controle da lagarta-da-soja, Anticarsia gemmatalis. • In: ainfo.cnptia.embrapa.br Fungos no Controle Biológico Beauveria bassiana http://comercialagricolasantacruz.blogspot.co m.br/2014/05/beauveria-bassiana.html Cigarrinha-das-pastagens infectada pelo fungo Metarhizium anisopliae. Fonte: Itaforte Bioprodutos. Metarhizium anisopliae Bactérias no Controle Biológico • Espécies de Bacillus são entomopatogênicos e letais para determinados insetos-praga, principalmente para as ordens Lepidoptera (borboletas e mariposas), Diptera (moscas e mosquitos) e Coleoptera (besouros). • As espécies utilizadas no controle biológico são: Bacillus thuringiensis e Bacillus sphaericus. • São vários os programas de controle biológico no Brasil que usam Bacillus para o controle de dípteros, incluindo os mosquitos transmissores da dengue e da febre amarela. Bactérias no Controle Biológico • B. thuringiensis (Bt) é uma bactéria gram-positiva, que pode ser caracterizada pela sua habilidade de formar cristais proteicos. • Bt ocorre naturalmente em diversos habitats incluindo solo, filoplano, resíduos de grãos, poeira, água, matéria vegetal e insetos. • O cristal proteico possui propriedades inseticidas específicas. • Este patógeno é ativo contra várias espécies de insetos e considerado seguro em relação aos mamíferos. • Outra vantagem é a especificidade em relação aos insetos-praga das diferentes culturas. • In: ainfo.cnptia.embr Bactérias no Controle Biológico https://www.blendspace.com Bacillus thuringiensis http://www.betterbugs.com Microrganismos no Controle Biológico Nunes Pinto & Fiuza, 2008 Vírus no Controle Biológico • Os baculovírus são o grupo mais comum e mais estudado dentre os grupos de vírus entomopatogênicos. • Isto deve-se ao fato de que são os vírus com o maior potencial a ser usado como agentes de controle biológico de pragas, sendo conhecidos mais de 20 grupos de vírus patogênicos a insetos. • Programas de controle biológico no Brasil, usando vírus entomopatogênicos: controle da lagarta-da-soja, Anticarsia gemmatalis; controle do mandarová da mandioca, Erinnyis ello; controle da lagarta-do-álamo, Condylorrhiza vestigialis; e, no controle da lagarta-do-cartucho do milho, Spodoptera frugiperda. • In: ainfo.cnptia.embr Vírus no Controle Biológico Lagarta escura, doente, contaminada por virus; lagarta branca, não contaminada. David Nance/USDA Agricultural Research Service Perspectivas para a biotecnologia Referência bibliográfica: • PELCZAR JÚNIOR, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia, conceitos e aplicações. São Paulo: Makron Books,1996. 2. ed. 517 p.