Análise Microbiológica da Água

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS 
FACULD ADE DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS 
 
TA615 – Microbiologia de Alimentos 
AULA PRÁTICA N°11 – ANÁLISE DE ÁGUA 
O exame microbiológico da água tem como objetivo principal, verificar sua potabilidade. Para 
a análise microbiológica, as amostras de água devem ser coletadas do ponto representativo do 
sistema de distribuição ou do reservatório a ser examinado. As amostras devem ser 
acondicionadas em frascos de vidro de 300 a 500 mL, previamente limpos e esterilizados. A 
lavagem dos frascos deve ser efetuada com bastante rigor, cuidando para que haja total remoção 
dos resíduos de produtos de limpeza, que poderiam atuar como agentes bactericidas, podendo 
levar a um resultado falso negativo. 
Portanto, enxaguar os frascos em água corrente limpa, repetindo o procedimento de 6 a 12 
vezes. A esterilização dos frascos deve ser em autoclave a 121°C durante 15 min., e com alguma 
reserva ferver por 30 minutos na água em ebulição. 
Para água clorada adicionar 0,1mL de uma solução 10% de tiossulfato de sódio (Na2S2O3) 
nos frascos de coleta antes da esterilização, para cada 100mL de amostra que se pretende coletar, 
a fim de se obter uma concentração final de 100 mg/mL, para remoção do cloro residual. Para 
amostra de água com até 5mg/L de cloro residual, adicionar 0,1 ml de solução de tiossulfato de 
sódio a 3% para cada 100mL d e amostra. 
Para a coleta das amostras da água do sistema de distribuição (torneira), limpar a área 
externa com álcool 70% e flambar (se o material for resistente ao calor); deixar a água fluir por 2 -3 
minutos antes da retirada da amostra. 
Nos rios, lagos, reservatórios e fontes não coletar as amostras nos locais de água estagnada ou 
próxima das margens. Evitar a entrada de materiais flutuantes no recipiente, durante a coleta. 
O frasco de vidro deve permanecer fechado e a tampa será retirada apenas o tempo 
suficiente para a coleta da amostra. Não encher o recipiente (deixar 1/3 do volume livre), para não 
dificultar a homogeneização da amostra para análise. Coletar 300mL de água, volume suficiente 
para a análise microbiológica completa. As amostras devem ser transportadas e armazenadas a 
temperatura de 4-10C, devendo ser analisadas dentro de 6h, e no máximo 24h, após a coleta. 
 
 
1. COLETA DE ÁGUA DO SISTEMA DE DISTRIBUIÇÃO (TORNEIRA) (Demonstrativo) 
 
Material: 
- 1 frasco de 500mL estéril contendo 0,3mL de solução de tiossulfato de sódio a 3%; 
- Algodão embebido com álcool 70% 
 
Procedimento: 
- Escolher o ponto de coleta do sistema de distribuição (torneira); 
- Limpar a área externa da torneira com álcool 70%; 
- Deixar a água fluir por 2-3 minutos antes da retirada da amostra; 
- Coletar aproximadamente 300mL de amostra de água. 
 
 
 
2. ANÁLISE DE COLIFORME S TOTAIS E TERMOTOLERANTES 
 
 2.1 NMP - ANÁLISE PRESUNTIVA 
 
Material: 
- Uma amostra de água; 
- Série de 10 tubos com 10mL de caldo LST (concentração dupla), contendo tubos de Durhan 
invertidos; 
- 1 pipeta de 10mL estéril. 
 
Procedimento: 
 
- Homogeneizar a amostra; 
- Inocular 10mL da amostra em cada tubo de caldo LST; 
- Incubar a 37°C por 24-48h; 
- Ler os tubos. Tubos positivos: gás retido no tubo de Durhan. 
 
 
2. 2. ANÁLISE CONFIRMATIVA - COLIFORMES TOTAIS E COLIFORMES TERMOTOLERANTES (Aula 
Seguinte) 
 
Material: 
 
- Tubos com 5mL de meio VB contendo tubos de Durhan invertidos (o n° de tubos vai depender 
do n° de tubos positivos da análise presuntiva). 
- Tubos com 5ml de caldo EC contendo tubos de Durhan invertidos (o n° de tubos vai depender 
do n° de tubos positivos da análise presuntiva). 
- 1 alça de inoculação. 
 
Procedimento: 
 
- Transferir uma alçada de todos os tubos positivos da análise presuntiva para os tubos de meio 
VB e tubos de meio EC. Incubar em Banho-Maria a temperatura de 44,5°C durante 24 – 48h os 
tubos de EC e os de VB, na estufa a 37ºC por 48h. 
- Ler os tubos. Tubos positivos: gás retido no tubo de Durhan. Os tubos positivos em meio VB são 
confirmativos para coliformes totais. Os positivos no meio EC, confirmativos para coliformes 
termotolerantes. 
- O resultado é dado pela leitura na tabela do NMP para 10 tubos (NMP água). 
 
3. CONTAGEM DE MICRO-ORGANISMOS HETEROTRÓFICOS 
 
Material 
 
- Uma pipeta de 1mL. 
- 2 placas de Petri estéril. 
- Agar PCA fundido. 
 
Procedimento: 
 
- Inocular 1mL da amostra de água coletada em uma p laca de Petri e na outra placa inocular 
0,1mL. Em seguida, adicionar 15-20mL de meio PCA fundido e à 50C. Homogeneizar e esperar 
solidificar. 
- Incubar a 37ºC de 24-48h. 
- Realizar a contagem das colônias e expressar os resultados em UFC/ml.