Biomedicina

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139Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
• Colônias incolores: não fermentadoras de lactose.
• Não há crescimento de cocos Gram positivos.
Conservação e validade: Conservar de 4 a 8°C por até 3 meses.
1.3. Produção do ágar Sangue
O meio de Ágar sangue, usando uma base rica como abaixo descrita, oferece ótimas 
condições de crescimento à maioria dos microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegros 
favorece a formação de halos de hemólise nítidos, úteis para a diferenciação de Streptococcus 
spp. e Staphylococcus spp. Este meio é usado para o isolamento de microrganismos não 
fastidiosos e para verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. Usado 
na prova de satelitismo (para identificação presuntiva de Haemophilus spp.).
Materiais:
- Álcool 70%; 
- Luvas;
- Bico de Bunsen;
- Alça de inoculação;
- Jaleco;
- Sabonete líquido; 
- Máscaras;
- Autoclave;
- Copo Becker;
- Placas de Petri;
- Pipetas de vidro ou descartáveis;
- Proveta;
- Estufa bacteriológica;
- Água deionizada;
- Meios comerciais: Blood Ágar Base, Columbia Ágar Base, BHI Ágar, Mueller Hinton Ágar; 
TSA Agar.
- Sangue desfibrinado de carneiro ou coelho: 5 mL para cada 100 mL de meio base. 
Procedimentos:
1. Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante.
2. Esterilizar em autoclave durante 15 minutos a 121°C, 1 atm.
3. Esfriar a base a +/- 50ºC.
4. Adicionar 5 mL de sangue desfibrinado de carneiro para cada 100 mL de base.
5. Homogeneizar delicadamente para não formar bolhas.
6. Distribuir em placas de Petri de 90 mm de diâmetro.
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7. Para o controle de qualidade observar o crescimento da cepa padrão:
• Streptococcus pyogenes ATCC 19615 ou Staphylococcus aureus ATCC 25923 com 
Hemólise beta hemolítica;
• Streptococcus do grupo viridans ou Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 com 
Hemólise alfa hemolítica:
• Enterococcus faecalis ATCC 29212 ou Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 
com Hemólise gama, ou seja, sem hemólise
Conservação e validade: Conservar de 4 a 10°C por 4 meses.
8. Estriar a superfície do meio, usando a técnica de semeadura para isolamento;
9. No final da semeadura, com o auxílio de uma agulha para semeadura picar o meio de 
forma alinhada para verificar hemólise em profundidade;
10. Incubar a 35 ºC por 24 horas.
11. Interpretando o resultado:
• Cor original do meio: vermelho.
• Beta hemólise: presença de halo transparente ao redor das colônias semeadas (lise 
total dos eritrócitos).
• Alfa hemólise: presença de halo esverdeado ao redor das colônias semeadas (lise 
parcial dos eritrócitos).
• Gama hemólise (sem hemólise): ausência de halo ao redor das colônias (eritrócitos 
permanecem íntegros).
Recomendações:
• Não usar sangue de carneiro vencido, pois o meio fica hemolisado ou com cor muito 
escura, dificultando o estudo de hemólise.
• Não usar sangue humano, pois alguns microrganismos não apresentam hemólise.
• Não adicionar o sangue na base do meio quente, pois as hemácias se rompem, 
dificultando o estude de hemólise.
• Por ser um meio rico, o crescimento a partir de materiais biológicos em geral 
costuma ser abundante, sempre que necessário, isolar a colônia em estudo para 
os procedimentos de identificação, para não correr o risco de trabalhar com cepas 
misturadas.
1.4. Produção do ágar CLED – Cystine Lactose Electrolyte Deficient
Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras 
urina. A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus. O meio serve para isolar e 
quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.
Materiais:
- Álcool 70%; 
- Luvas;
- Bico de Bunsen;