Biomedicina

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43Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
melaninas. Essas reações de escurecimento enzimático podem ser mais facilmente observadas 
em vegetais de cores claras como batatas, bananas e maçãs.
Os compostos produzidos na reação absorvem luz na região do espectro entre 320 a 450 
nm e, portanto, pode-se avaliar espectrofotometricamente a atividade da polifenol oxidase.
Esta prática tem por objetivo extrair e avaliar a atividade da polifenol oxidase na banana.
Procedimento
1. Extração da polifenol oxidase da banana
Pesar 23 g de banana e homogeneizar em um liquidificador juntamente com 100 mL de 
tampão citrato-fostato (ácido cítrico 0,1M + K2HPO4 0,1M, pH 6,0). Centrifugar a 3000 rpm por 
20 min. O sobrenadante é um substrato aquoso que contém a polifenol oxidase.
2. Determinação da atividade da polifenol oxidase
Preparar 2 tubos de ensaio contendo em cada um deles 2,0 mL de pirogalol 0,1M e 3 mL 
do tampão citrato-fosfato, pH 6,0. Um tubo será o branco (B) e o outro tubo teste (T). 
Tubos Substrato - pirogalol (mL)
Tampão Cítrico-Fosfato 
pH 6,0 (mL)
H2O (mL)
B 2,0 3,0 -
T 2,0 3,0 -
C - 3,0 2,0
Observação: Zerar o espectrofotômetro com água em 390 nm.
Fazer as seguintes adições, na ordem:
Tubo B (branco) – 0,1 mL de água
Tubo C (controle) – 0,1 mL do extrato (não contém o substrato)
Tubo T (teste) – 0,1 mL do extrato. Disparar imediatamente o cronômetro e proceder à 
leitura das absorbâncias nos tempos indicados na tabela:
Tempo (min.) Teste - Absorbâncias (390nm)
0,5 (30seg)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Terminada a leitura de todos os tempos indicados proceder a leitura dos tubos branco 
(B) e controle (C).
44Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Para cada um dos tempos fazer a seguinte subtração:
Abs = (Abs. teste – Abs. branco) e (Abs. controle – Abs. branco)
Fazer uma representação gráfica da absorbância em função do tempo.
6. PRÁTICA: Reações de coloração de aminoácidos e proteínas
Esta prática tem por objetivo caracterizar a presença de proteínas em materiais 
biológicos, reconhecer diferentes métodos de identificação colorimétrica de aminoácidos e 
proteínas e identificar diferenças entre as técnicas de detecção de aminoácidos e proteínas 
utilizadas.
Aminoácidos que apresentam grupo a-amino livre, quando aquecidos em presença de 
ninidrina, formam um produto de coloração púrpura. A coloração obtida é proporcional à 
concentração de aminoácidos existente. Esta reação dá resultado positivo para aminoácidos, 
proteínas e outras aminas primárias. Prolina e hidroxiprolina, por serem aminoácidos, dão 
coloração amarela. Durante a reação, há formação de CO2 e amônia. Pode-se determinar 
a quantidade de aminoácidos medindo-se as quantidades que se produzem destas duas 
substâncias. Outra forma de medir a concentração de aminoácidos é através da intensidade 
de cor produzida, utilizando-se o método colorimétrico.
Fonte: http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/reacoes_coradas.htm
Procedimento:
1. Preparar um banho-maria fervente
2. Colocar em um tubo de ensaio 3,5 mL de solução de ovoalbumina
3. Adicionar 0,5 mL de solução de ninidrina
4. Misturar por inversão
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