Biomedicina

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147Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Recomendações: Evitar o uso de placas úmidas e, depois de semeada, não incubar caso 
haja umidade na superfície do ágar.
Evitar o rompimento do ágar, estriando o material suavemente.
Uma suspensão com 105 UFC/ml deve resultar em um tapete de colônias que cubra toda 
a superfície do ágar de maneira uniforme, com colônias confluentes.
4. A incubação deve seguir alguns parâmetros determinados, conforme abaixo:
Atmosfera
• Para bactérias não exigentes em secreções, urina, fezes, etc. incubar em estufa em 
atmosfera ambiente.
• Para bactérias exigentes tais como: pneumococos, hemófilos e Neisserias ou 
fastidiosos incubar em microaerofilia (Jarra com vela acesa de modo a obter 3 a 5% 
de CO2).
• Para Campylobacter é necessária tensão de 5 a 10% de CO2 e restrição de O2 sendo 
conveniente o uso de geradores específicos.
• Para bactérias anaeróbias, incubar em sistema de anaerobiose estrita.
Temperatura
• 36oC +/- 1oC é a temperatura para a grande maioria das bactérias da rotina, incluindo 
os anaeróbios e micobactérias.
• Fungos podem ser cultivados a 30oC ou 25 e 35oC.
• Temperatura à 42oC pode ser necessário para isolar espécies de Campylobacter, 
Acinetobacter baumannii, e algumas espécies de Pseudomonas.
Umidade
• Bactérias fastidiosas e exigentes (neisserias patogênicas e hemófilos) crescem melhor 
se forem incubadas num recipiente com tensão de 5% de CO2 com um chumaço de 
algodão embebido em água estéril.
Tempo
• Em geral a primeira leitura é realizada com 18 a 24 horas de incubação ou em casos 
de urgência para iniciar a identificação e antibiograma, a partir de 6 horas é possível 
visualizar crescimento de algumas enterobactérias.
• Para anaeróbios é recomendável a primeira leitura com 48 a 72 horas de incubação.
• Para bactérias exigentes ou de crescimento lento o período de incubação pode ser 
bastante prolongado: Micobactérias de 3 a 45 dias; Nocardia, 4 a 7 dias; Brucella 3 a 7 
dias (hemoculturas até 45 dias).
3. Coloração de Gram
A coloração de Gram é a principal técnica de identificação bacteriana. Com a coloração é 
possível visualizar a morfologia individual e as reações tintoriais nas quais as bactérias reagem 
frente aos corantes. A amostra utilizada deve ser o material coletado de sítio anatômico com 
suspeita de infecção ou colônia bacteriana isolada. 
148Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Materiais:
- Lâminas; 
- Água ou solução salina (0,85%); 
- Bico de Bunsen;
- Alça de inoculação;
- Microscópio;
- Violeta de Genciana;
- Lugol;
- Álcool;
- Fucsina;
Procedimentos:
1. Com uma agulha microbiológica estéril, pegar pequena porção de uma colônia isolada 
ou amostra coletada e passar para uma lâmina limpa e identificada.
2. Para facilitar a leitura, pode-se homogeneizar o material com uma gota de solução 
salina estéril em movimentos centrífugos, se necessário;
3. Aguardar para que seque e fixar rapidamente sobre a chama.
4. Cobrir o esfregaço com solução de Violeta de Genciana por um minuto.
Dica: Cuidado para não colocar a lâmina invertida.
5. Retirar o corante em água corrente.
6. Cobrir o esfregaço com Lugol durante um minuto.
7. Retirar com água corrente.
8. Gotejar o álcool rapidamente.
9. Repetir o passo 8 até notar que não remove mais o excesso de corante. 
10. Cobrir o esfregaço com Fucsina durante 30 segundos.
11. Retirar o corante com água corrente examinar o esfregaço no aumento de 100X. 
Lembrar de usar o óleo de imersão.
Observação microscópica:
• Gram Positivo: roxo;
• Gram Negativos: rosa;