Biomedicina

Prévia do material em texto

89Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Materiais:
- Luvas;
- Jaleco;
- Pipetadores;
- Ponteiras;
- Leitora de microplaca de Elisa;
- Kit para dosagem da Eritropetina (Epo) por ELISA. 
- Amostra de Soro;
- PBS (tampão de lavagem).
Procedimentos: 
1. Estabelecer o plano de distribuição e identificação das amostras e dos controles na 
microplaca de Elisa. 
2. Abrir a embalagem que contém a microplaca. Retirar as strips de poços em excesso e 
guardá-las na embalagem que contém o dissecante e voltar a selá-la.
3. Pipetar 100 µL de Diluente de Ensaio Epo para cada poço.
4. Adicionar 100 µL de padrão, controle ou amostra por poço. Bater levemente na 
microplaca durante cerca de 1 minuto para misturar o conteúdo dos poços. Cobrir a 
microplaca com a película fornecida. 
5. Incubar durante 2 horas à temperatura ambiente.
6. Aspirar bem o conteúdo de cada poço. Secar bem invertendo a microplaca sobre 
toalhas de papel. 
7. Não lavar.
8. Adicionar 200 µL de Conjugado Epo a cada poço. Cobrir a placa com uma nova película 
adesiva.
9. Incubar durante 2 horas à temperatura ambiente.
10. Aspirar cada poço e lavar, repetindo o processo três vezes, num total de 4 lavagens. 
A lavagem efetua-se enchendo cada poço com Tampão de Lavagem (400 µL), usando 
pipetador automático. A remoção completa do líquido, em cada passo, é essencial. 
11. Após a última lavagem, remover qualquer vestígio de Tampão de Lavagem por 
aspiração, ou invertendo a placa de encontro a uma toalha de papel.
12. Adicionar 200 µL de Solução Substrato a cada poço (Nota: a Solução Substrato deve 
ser utilizada no prazo de 15 minutos após preparação). 
13. Incubar durante 20-25 minutos à temperatura ambiente (20-25° C). 
14. Adicionar 100 µL de Solução Stop a cada poço. Se a mudança da cor não parecer 
uniforme, agitar a placa com cuidado para assegurar uma boa mistura.
15. Determinar a absorbância de cada poço no prazo de 15 minutos, utilizando uma 
leitora ou espectrofotômetro de placa regulado a 450 nm. 
16. Avaliar a concentração de Epo conforme protocolo do kit. 
90Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Referências
BRASIL. Guia para uso de hemocomponentes. Ministério da Saúde.Brasília, 2009.
HENRY, J.B. Diagnósticos Clínicos e Tratamento por Métodos Laboratoriais. Editora 
Manole,1999.
JANEWAY, Charles A. et al. Imunobiologia: o sistema imune na saúde e na doença. 6ª.ed. 
Porto Alegre: Artmed, 2007. 
LIMA; et al. Métodos de laboratórios aplicados à clínica. 7 ed. São Paulo: Guanabara Koogan, 
1992.