Biomedicina

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19Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
b) Tampão Alcalino de Eletroforese
Utilizado para desnovelamento das cadeias de DNA e exposição dos sítios álcali-
lábeis. Inicialmente preparar a solução A e a solução B e depois unir formando a 
solução de uso.
Solução A
- Pesar 200g NaOH 10N
- Adicionar 500 mL de água destilada
- Colocar em vidro âmbar e armazenar em temperatura ambiente.
Solução B
- Pesar 14,89g EDTA 200mM
- Adicionar 200 mL de água destilada
- Colocar em vidro âmbar, e armazenar em temperatura ambiente.
Solução de Uso: Misturar 30 mL da solução A com 5 mL da solução B e adicionar 965 
mL de água destilada. 
c) Tampão de Neutralização
- Pesar 48,5g Tris 0,4M e adicionar água destilada até completar 1000 mL.
- Ajustar o pH 7,5 com HCl.
d) Coloração com Nitrato de Prata
Preparar as soluções para a coloração. 
Solução Fixadora
- Ácido tricloroacético (15%)
- Sulfato de zinco (5%)
- Glicerol (5%)
- Água destilada (75%) 
- Armazenar em temperatura ambiente.
Solução Corante
Preparar as soluções A e B e depois unir formando a solução de uso. 
Solução A: 
- Carbonato de Sódio (5%) diluído água destilada e armazenar em temperatura 
ambiente.
Solução B
- Nitrato de amônio (0,1%)
- Nitrato de Prata (0,1%)
- Ácido tungstosalicílico (0,25%)
- Formaldeído (0,15%)
- Adicionar água destilada 
20Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
- Armazenar em temperatura ambiente.
Solução de Uso: Adicionar a Solução A com a Solução B (na proporção 1:2)
e) Solução de Parada
- Ácido acético (1%) e água destilada (99%) e armazenar em temperatura ambiente.
f) Tampão PBS
- 8 g NaCl
- 0,2 g KCl
- 1,44 g Na2HPO4
- 0,24g KH2PO4
- Adicionar água destilada até completar 1000 mL 
- Ajustar pH 7,4 com HCl
- Filtrar com filtro estéril para remover partículas não dissolvidas.
Preparo dos Géis de Agarose
a) Agarose Low Melting
- 0,07g Agarose Low Melting
- 10 mL PBS
- Dissolver em micro-ondas
b) Agarose Padrão
- 0,15g Agarose padrão
- 20 mL PBS
- Dissolver em micro-ondas
2. Processamento das amostras.
Dica: Todo o processamento das amostras deve ser feito com as luzes desligadas ou com 
o mínimo possível de luminosidade. Pois a radiação UV pode causar dano no DNA.
3. Preparar as lâminas tratadas com pré-cobertura da seguinte forma:
- Identificar as lâminas com tarja fosca: asterisco no alto do canto esquerdo;
- Mergulhar a parte superior da lâmina na agarose regular já dissolvida;
- Deixar secar em temperatura ambiente.
4. Confeccionar as lâminas com sangue total humano conforme descrito abaixo:
- Coletar o sangue total em tubos contendo anticoagulante EDTA, envoltos com papel 
alumínio;
- Preparar a solução de lise de uso, deixando-a esfriar até 4º C; 
- Dissolver a agarose low melting em micro-ondas e deixar em banho-maria a 40ºC;
- Pipetar 5 μL de sangue total em um eppendorf de 0,2 mL;
- Pipetar 95 μL de agarose low melting e dispensar no mesmo eppendorf do sangue e, 
ao mesmo tempo, repipetar a mistura;