Biomedicina

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45Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
5. Aquecer em banho-maria fervente por 5 minutos
6. Anotar a coloração desenvolvida
7. Observar e interpretar.
6.1. Reação de Biureto
Essa reação identifica a presença de ligações peptídicas na molécula em estudo. O reativo 
de Biureto é composto por sulfato de cobre e tartarato de sódio e potássio alcalinizados. A 
positividade da reação verifica-se pelo aparecimento de uma coloração que varia da cor rosa 
ao violeta. Em meio alcalino, o íon cúprico do reativo forma um complexo com compostos 
que contém dois grupos carbamilas (–CONH2) unidos diretamente através de um átomo de 
carbono ou nitrogênio. O aparecimento da coloração deve-se à formação de um complexo 
de coordenação do íon cúprico com átomos de nitrogênio da ligação peptídica. Essa reação 
só será positiva quando o material analisado for composto de pelo menos duas ligações 
peptídicas (tripeptídeos). As soluções de polipeptídeos ou proteínas por apresentarem várias 
ligações peptídicas dão reação positiva.
Fonte: ADAPTADO de https://www.thermofisher.com/br/en/home/life-science/protein-biology/protein-biology-
learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/chemistry-protein-assays.html
Procedimento:
1. Colocar em um tubo de ensaio 3 mL da solução de ovoalbumina
2. 1 mL do reativo de Biureto
3. Misturar por inversão
4. Observar a coloração desenvolvida
5. Observar e interpretar.
6. A formação de coloração violácea indica positivo para proteína.
6.2. Reação Xantoproteica
Essa reação tem como finalidade identificar a presença de aminoácidos que possuem 
anel benzênico substituído na molécula. Radicais aromáticos reagem com o ácido nítrico para 
formar nitroderivados que se tornam alaranjados em meio alcalino. A reação é positiva quando 
aparece uma coloração alaranjada no tubo de ensaio onde ocorreu a reação. Os aminoácidos 
que respondem positivamente a este teste são a tirosina e o triptofano. Nas condições em que 
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a reação xantoproteica é realizada, o benzeno da fenilalanina não é reativo o suficiente para 
reagir positivamente a este teste.
Procedimento:
1. Colocar em um tubo de ensaio 3 mL da solução de ovoalbumina.
2. Adicionar 1 mL de ácido nítrico concentrado e observar a formação de um precipitado 
branco.
3. Aquecer com cuidado, observar o que ocorre com a cor do precipitado e anotar.
4. Esfriar em água corrente
5. Gotejar hidróxido de sódio a 40% até o surgimento da cor laranja
6. Observar e interpretar.
7. A reação é positiva quando ocorre formação de uma solução amarelada.
6.3. Reação de Millon
As proteínas que apresentam aminoácidos com grupo fenólico na sua estrutura, na 
presença do reativo de Millon, desenvolvem coloração vermelha. A reação ocorre mediante 
aquecimento. O reagente de Millon é preparado através da dissolução de mercúrio em ácido 
nítrico concentrado. Desta forma, a solução obtida deve conter nitrato mercuroso com traços 
de ácido nitroso.
Procedimento:
1. Colocar em um tubo de ensaio 2 mL da solução de ovoalbumina
2. 5 gotas de reagente de Millon
3. Aquecer em banho-maria fervente durante 2 minutos
4. Observar e interpretar.
5. A solução torna-se roxa avermelhada quando positiva.
6.4. Método de Heller - Determinação de Albumina na urina
Nesta reação ocorre a coagulação da proteína presente na urina através do ácido nítrico. 
Esta coagulação ocorre pela perda da solubilidade da proteína no estado desnaturado. Esta 
prática tem por objetivo evidenciar a presença de proteinúria pela desnaturação com ácido 
nítrico.
Procedimento:
1. Em um tubo de ensaio, pipetar 3 mL de urina filtrada e adicionar 2 mL de ácido nítrico 
lentamente no fundo do tubo, de modo que os dois líquidos não se misturem;
2. A formação de anel branco e leitoso na superfície de contato dos dois líquidos 
demonstra resultado positivo.
6.5. Método Sulfossacílico - Determinação de Albumina na urina
Nesta reação ocorre a desnaturação da proteína pelo ácido com formação de 
metalproteína.