Biomedicina

Prévia do material em texto

17Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
Fonte: Adaptado de FRANCESCHI, 2011.
1. PRÁTICA: Ensaio cometa em linfócitos humanos
Materiais:
- Luvas;
- Jaleco;
- Solução de lise;
- Tampão alcalino de eletroforese;
- Tampão de Neutralização;
- Solução de parada;
- PBS;
- Soluções para coloração com nitrato de prata;
- Agarose low melting;
- Agarose padrão;
- Lâminas;
- Lamínulas;
- Erlenmeyer;
- Provetas;
- Pipetas automáticas;
- Ponteiras;
- Cuba de eletroforese;
- Fonte para eletroforese;
- Caixas para coloração de lâminas;
18Biomedicina na prática: 
da teoria à bancada SUMÁRIO
- Gelo;
- Água destilada;
- Frascos para armazenar soluções (âmbar e padrão);
- Provetas;
- Estufa;
- Medidor de pH;
- Micro-ondas;
- Microscópio óptico;
- Banho-maria;
- Microtubos eppendorf.
Procedimentos:
1. Preparar todas as soluções e os géis de agarose.
Preparo das soluções
a) Solução de Lise 
Utilizada para degradar a membrana plasmática, deixando apenas o núcleo.
Preparar inicialmente a solução mãe:
- Pesar 146,1g NaCl 2,5M
- Pesar 37,2g EDTA 100mM
- Pesar 1,2g Tris 10mM
- Adicionar água destilada até completar 890 mL.
- Ajustar o pH para10 com NaOH (aproximadamente 12g)
- Estocar em temperatura ambiente.
Solução de Uso
- 1 mL Triton X-100
- 10 mL DMSO
- 89 mL da solução de Lise Mãe
- Refrigerar por 60 minutos antes do uso.