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Profa. MSc. Sandra Moretto UNIDADE II Princípios Analíticos Farmacêuticos Validação é um ato documentado que atesta que qualquer procedimento, processo, equipamento, material, operação ou sistema realmente conduza aos resultados esperados. A validação dos métodos analíticos tem por objetivo demonstrar que os métodos de ensaios utilizados apresentam resultados que permitem avaliar objetivamente a qualidade dos medicamentos, conforme os parâmetros especificados. Os equipamentos, instrumentos e vidrarias utilizados nos ensaios analíticos devem estar qualificados e ou certificados. Os instrumentos de medição usados para esta qualificação, devem estar calibrados. Validação de Métodos Analíticos Benefícios ... Conhecimento profundo do processo “Robustez” do processo Redução do risco de falha Aderência às Normas de Qualidade, para efeito de registro de produto e inspeções. Manutenção dos Padrões de Qualidade Validação de Métodos Analíticos Qual o preço? Dinheiro = Custo Tempo = Demora Recursos = Custo e a demora (pessoas) Validação de Métodos Analíticos Validação, segundo a NBR ISO/IEC 17025, é a confirmação, por exame e fornecimento de evidência objetiva, de que os requisitos específicos para determinado uso pretendido estão sendo atendidos. As normas internacionais, nacionais e sistemas da qualidade destacam a importância da validação de métodos analíticos e a documentação do trabalho de validação, para a obtenção de resultados confiáveis e adequados ao uso pretendido. Validação de Métodos Analíticos INSTITUTO NACIONAL DE METROLOGIA, NORMALIZAÇÃO E QUALIDADE INDUSTRIAL (INMETRO). DOQ CGCRE 008: orientações sobre validação de métodos de ensaios químicos. Disponível em: http://www.inmetro.gov.br. BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RDC nº 166, de 24 de Junho de 2017. Dispõe sobre Validação de Métodos Analíticos. Validação de Métodos Analíticos Os métodos de ensaios usados para avaliar a conformidade de medicamentos com especificações estabelecidas devem atingir padrões adequados de exatidão, precisão e confiabilidade. Validação de métodos é um aspecto vital da garantia da qualidade analítica. Quando devemos validar um método analítico ? Deve-se validar métodos não normalizados, criados/desenvolvidos pelo laboratório, normalizados utilizados fora dos escopos para os quais foram concebidos, ampliações e modificações de métodos normalizados. Validação de Métodos Analíticos Deve assegurar que determinado procedimento analítico selecionado dê resultados reprodutíveis e confiáveis e que sejam adequados aos fins para os quais tenha sido planejado. Para a garantia da qualidade analítica dos resultados, todos os equipamentos utilizados na validação devem estar devidamente calibrados e os analistas devem ser qualificados e adequadamente treinados. Validação de Métodos Analíticos A metodologia analítica deverá ser revalidada nas seguintes circunstâncias: mudanças na síntese da substância ativa; mudanças na composição do produto acabado; mudanças no procedimento analítico. Validação de Métodos Analíticos Qual é o documento oficial publicado pela Anvisa que dá as diretrizes para conduzir a validação de métodos analíticos, e dessa forma garantir que o método é adequado ao seu propósito? Interatividade O documento é a RDC 166 de 25 de Julho de 2017, que dispõe sobre Validação de Métodos Analíticos físico-químicos. Resposta Características de desempenho: Especificidade; Linearidade; Intervalo; Limite de detecção (sensibilidade); Limite de quantificação; Precisão; Exatidão; Robustez. Validação de Métodos Analíticos – Parâmetros Especificidade do método analítico refere-se à capacidade de medir com exatidão o analito de interesse em presença de outros componentes ou interferentes que possam estar presentes na matriz da amostra. Especificidade ou Seletividade Especificidade do método é demonstrada como o desvio dos resultados obtidos pela análise do analito de interesse em amostras fortalecidas com todos os interferentes e os resultados obtidos com amostras não fortalecidas, contendo somente o analito. Isto deve ser confirmado pela obtenção de resultados positivos (preferivelmente em relação ao material de referência conhecido) em amostras contendo o ativo, comparativamente com resultados negativos obtidos com amostras que não contém o ativo, mas compostos estruturalmente semelhantes. Especificidade ou Seletividade Linearidade é a habilidade do método analítico de reproduzir resultados que são diretamente, ou por uma transformação matemática bem definida, proporcionais à concentração do analito dentro de uma dada faixa. A faixa de aplicação do método analítico é validada verificando se o método fornece precisão, exatidão e linearidade aceitáveis quando aplicado a amostras contendo analito nos extremos da faixa e dentro da mesma. Linearidade Linearidade Fonte: https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc= s&source=web&cd=1&ved=2ahUKEwj6tLiBm9Tm AhUoErkGHRx6AZYQFjAAegQIAhAC&url=http% 3A%2F%2Fserv- bib.fcfar.unesp.br%2Fseer%2Findex.php%2FCien _Farm%2Farticle%2Fdownload%2F325%2F315& usg=AOvVaw0kmwiCD1zyZ2z_Pd2FEpYM Tabela 3 - Resultados da linearidade. Concentração de CaCO3 (mg) Concentração de CaCO3 (mg) Média das curvas (mg) DPR (%) Curva 1 Curva 2 Curva 3 100 98,33 97,58 97,33 97,75 0,53 125 121,10 121,35 121,10 121,18 0,12 150 145,37 145,62 146,12 145,70 0,26 175 171,14 170,14 172,64 171,31 0,73 250 245,20 247,70 246,20 246,37 0,51 Gráfico de Regressão linear C o n c e n tr a ç ã o 250,00 200,00 150,00 100,00 50,00 0,00 0 50 100 150 200 250 mg R = 0,99967 O Intervalo especificado é a faixa entre os limites de quantificação superior e inferior do método analítico. Normalmente é derivado do estudo de linearidade e depende da aplicação pretendida do método. É estabelecido pela confirmação de que o método apresenta exatidão, precisão e linearidade adequados quando aplicados a amostras contendo quantidades de substância dentro do intervalo especificado. Na determinação quantitativa do analito em matérias-primas ou em produtos prontos. Intervalo Limite de detecção (LD) é a menor concentração do analito em uma amostra, que pode ser detectada, mas não necessariamente quantificada, sob determinadas condições experimentais. Existem muitos critérios para definição do limite de detecção. O limite de detecção é estabelecido por meio da análise de soluções de concentrações conhecidas e decrescentes do analito, até o menor nível detectável. Limite de Detecção Limite de quantificação (LQ) do método analítico é a menor concentração do analito que pode ser determinada com precisão e exatidão, aceitável, sob determinadas condições experimentais. Limite de Quantificação A precisão é a avaliação da proximidade dos resultados obtidos em uma série de medidas de uma amostragem múltipla de uma mesma amostra. Esta é considerada em três níveis. Repetibilidade (precisão intracorrida): Concordância entre os resultados dentro de um curto período de tempo com o mesmo analista e mesma instrumentação. Precisão Precisão intermediária (precisão intercorridas): Concordância entre os resultados do mesmo laboratório, mas obtidos em dias diferentes, com analistas diferentes e/ou equipamentos diferentes. Para a determinação da precisão intermediária recomenda-se um mínimo de 2 dias diferentes com analistas diferentes. Precisão Reprodutibilidade (precisão interlaboratorial): Concordância entre os resultados obtidos em laboratórios diferentes como em estudos colaborativos, geralmente aplicados à padronização de metodologia analítica, por exemplo, para inclusão de metodologia em farmacopeias. Estes dados não precisam ser apresentados para a concessão de registro.Precisão É a concordância entre o resultado de um ensaio e o valor de referência aceito como convencionalmente verdadeiro. A exatidão (tendência) de um método analítico é geralmente determinada pelo estudo de materiais de referência relevantes. Relação entre Exatidão Valor observado/valor esperado Determinando a Exatidão para um ativo. Aplicando-se a metodologia analítica proposta na análise de uma substância de pureza conhecida (padrão de referência). Comparação dos resultados obtidos com aqueles resultantes de uma segunda metodologia bem caracterizada, cuja exatidão tenha sido estabelecida. Exatidão Exemplos Preparo das Amostras Estabilidade das soluções analíticas Tempo de extração Espectrofotometria Variação do pH da solução Temperatura Diferentes fabricantes de solventes Robustez Cromatografia Líquida Variação do pH da fase móvel Variação na composição da fase móvel Diferentes lotes ou fabricantes de colunas Temperatura Fluxo da fase móvel Cromatografia Gasosa Diferentes lotes ou fabricantes de colunas Temperatura Velocidade do gás de arraste Robustez Segundo a RDC 166 de 2017, o grau de concordância entre os resultados individuais, obtidos por um método em estudo, em relação a um valor de referência aceito como verdadeiro é avaliado através de qual parâmetro? Interatividade A exatidão é o parâmetro que avalia a concordância de um valor, frente a um valor de referência considerado de referência. Resposta AVALIAÇÃO O aluno produzirá dois ou três trabalhos ao longo do semestre: 1 - O primeiro trabalho consiste na elaboração de um relatório com o objetivo de demonstrar como é elaborado e interpretado um laudo de calibração de uma vidraria, instrumento de medição ou equipamento que será escolhido pelo aluno, baseada nas diretrizes da Anvisa, Inmetro e ABNT. O(s) aluno(s) deverá(ão) buscar na internet ou em outra fonte um laudo de calibração do instrumento ou equipamento escolhido, e interpretá-lo. Desenvolvendo o Relatório Para a segunda postagem, o grupo deverá escolher um método analítico, utilizado na determinação do teor de um ativo, na Farmacopeia Brasileira 6ª Edição e descrever todas as etapas para que o mesmo torne-se validado. O método escolhido pode ser um método instrumental ou não. O(s) aluno(s) deverá(ão) elaborar e discutir um relatório final para a validação do método analítico escolhido. Desenvolvendo o Relatório Se o aluno não atingir pontuação necessária para a aprovação, este precisará preparar a atividade 3, que consiste em apresentar um artigo científico em formato de revisão de literatura que contenha a descrição de: a) Guias, manuais e regulações da Anvisa, Inmetro, ABNT e demais órgãos regulatórios que preconizam a validação de métodos analíticos e calibração de instrumentos de medição. b) Comparar os documentos do Inmetro com o documento da Anvisa na validação de métodos analíticos, c) Identificar indicação de revalidação de método analítico; d) Apresentar as Normas ABNT utilizadas como referência de erro de vidrarias classe A e classe B. Desenvolvendo o Relatório Os relatórios devem apresentar o conteúdo da seguinte forma: 1. CAPA (modelo a seguir). (disponível no Manual da disciplina) 2. RESUMO 3. INTRODUÇÃO 4. DESENVOLVIMENTO DO RELATÓRIO 5. CONCLUSÃO 6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Desenvolvendo o Relatório Relatório Elaboração do resumo O resumo do relatório deve ser o suficiente para que o leitor tenha uma ideia geral do relatório. O Resumo por si só deve ser capaz de responder às seguintes questões: Porque você realizou o relatório (Objetivos ou Questões identificadas) O que foi realizado por você no relatório? (Procedimentos e Métodos Adotados): não detalhe os materiais utilizados, concentre-se em descrever procedimentos realizados. Desenvolvendo o Relatório O texto do resumo pode ser redigido em parágrafo único, contanto que o mesmo seja sintético e respeite o limite MÁXIMO de 500 palavras. O texto do resumo NÃO deve: a) incluir agradecimentos ou mencionar apoiadores do relatório. b) desenhos, diagramas ou tabelas. Palavras-chave são palavras ou termos essenciais ou representativos do projeto. Ao escolher estas palavras ou termos, pense naqueles que imediatamente podem ser associados ao seu relatório. Desenvolvendo o Relatório Elaboração da Introdução É a parte do trabalho em que o assunto é apresentado como um todo, sem detalhes. A introdução deve: a) Estabelecer o assunto de forma sucinta sem deixar dúvidas. Evidenciar o período de abrangência do relatório, incluindo informações sobre a natureza e a importância do tema; b) Indicar os objetivos, a finalidade e a justificativa do trabalho; c) Destacar os tópicos principais do texto, dando o roteiro ou a ordem de exposição, exceto os resultados obtidos. Desenvolvendo o Relatório d) Motivos, por exemplo, que levaram a escolher a metodologia analítica para validar. e) Apresentar os objetivos, ou seja, o que se pretende com o desenvolvimento do trabalho e quais resultados se procura alcançar; f) Apresentar a justificativa que consiste na apresentação das razões de ordem teórica e/ ou prática que justificam a realização do relatório. Desenvolvendo o Relatório Elaboração do Desenvolvimento É o momento em que o relatório se desenvolve. No Manual da disciplina, os alunos poderão encontrar as diretrizes relativas a cada projeto, bem como orientação para desenvolver a investigação para cada projeto. Desenvolvendo o Relatório Conclusão do Relatório Deve estar alinhada com os objetivos da proposta do Relatório. Deve ser sucinta e elaborada com as próprias palavras. Desenvolvendo o Relatório Elaboração das referências bibliográficas Regras ABNT Todas as obras citadas no artigo acadêmico devem estar referenciadas na bibliografia. As informações exigidas para uma referência, em ordem, são: autor, título da obra, local, editora e data de publicação. FULANO, D.; SICLANO, T.; BELTRANO, G. Título em negrito. Cidade de publicação: Editora, ano. Desenvolvendo o Relatório ***ATENÇÃO! Para o relatório, o grupo deve seguir estritamente as orientações constantes no manual dessa disciplina. Qualquer relatório diferente do que está sendo aqui proposto poderá levá-lo à reprovação. Desenvolvendo o Relatório Tema: Parâmetro Precisão na validação de um método analítico. Atividade: Verificar se um método é preciso pela avaliação de um dos requisitos requeridos pela RDC 166 de 2017: Avaliação da Repetitividade. Atividade Individual: Uso de calculadora . Convite à participação do chat ATÉ A PRÓXIMA!